緑内障における網膜神経節細胞死に対するCDP-cholineの影響について

CDP-胆碱对青光眼视网膜神经节细胞死亡的影响

基本信息

批准号：
15790988
负责人：
山田裕子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790988/
关键词：
緑内障アポトーシス CDP-choline 神経保護

项目摘要

緑内障における網膜神経節細胞の細胞死には、グルタミン酸毒性やアポトーシスが関わるとされ、本疾患の治療における神経保護は命題である。CDP-choline(Citicoline)は、リン脂質の産生に重要な内因性ヌクレオシドで、膜安定化作用、アセチルコリンの生合成促進およびドーパミン代謝回転の改善作用等を有する薬剤であり、脳虚血において、アポトーシスの一部の系を抑制し、ドーパミンを増加させる。本研究においては、Citicolineが、緑内障性視神経症に対して神経保護作用を有するかを明らかにするため基礎的検討を行った。網膜への分化能を有する培養細胞にアポトーシスを誘導しCiticolineがこれを抑制するかについて検討したところ、Citicolineは濃度依存性にアポトーシス抑制効果を呈する傾向にあった。また、疾患モデル動物として、ラット高眼圧モデルを作製し、(1)Citicolille投与高眼圧群、(2)Citicoline投与眼無処置群、(3)対象高眼圧群および(4)対象群とした。網膜神経細胞死について、眼球から、網膜を摘出し、一眼は固定後スライドグラス上に伸展標本を作製し、TUNEL(terminal dUTP nick end labeling)染色を行った。また、他眼は固定後カスペース3免疫染色を行い、スライドグラスに伸展標本を作製した。光学顕微鏡下でTUNEL陽性細胞、蛍光顕微鏡下でカスペース3免疫組織陽性細胞数を全網膜にわたりカウントし単位面積あたりの陽性細胞数を各群間で比較したところ、in vivoにおいてアポトーシスを抑制する傾向にあった。これらについて次年度に引き続き例数を蓄積した上で統計学的検討を行うとともに、慢性高眼圧モデル、虚血再灌流モデルなど各緑内障モデルでの効果についても検討する。

谷氨酸毒性和细胞凋亡被认为与青光眼视网膜神经节细胞的细胞死亡有关，神经保护对于治疗这种疾病至关重要。 CDP-胆碱（胞二磷胆碱）是一种内源性核苷，对磷脂的产生很重要，是一种具有膜稳定作用、促进乙酰胆碱生物合成、改善多巴胺周转、抑制某些系统并增加多巴胺的药物。在这项研究中，我们进行了一项基础研究，以阐明胞二磷胆碱是否对青光眼性视神经病变具有神经保护作用。当我们研究胞二磷胆碱是否通过诱导具有分化为视网膜能力的培养细胞凋亡来抑制细胞凋亡时，我们发现胞二磷胆碱对细胞凋亡的抑制作用往往具有浓度依赖性。另外，创建大鼠高眼压症模型作为疾病模型动物，并使用以下组：(1)给予胞二磷胆碱的高眼压症组，(2)给予胞二磷胆碱的眼部未治疗组，(3)目标高眼压症组，和（4）对照组。关于视网膜神经细胞死亡，从眼球取出视网膜，固定一只眼睛，在载玻片上制备拉伸样本，并进行TUNEL（末端dUTP缺口末端标记）染色。另外，固定另一只眼睛并进行caspase 3免疫染色，并在载玻片上制备拉伸标本。计数全视网膜光镜下TUNEL阳性细胞数和荧光显微镜下caspase-3免疫组织阳性细胞数，比较各组单位面积的阳性细胞数，发现存在抑制体内细胞凋亡的倾向。明年，我们将继续积累病例数，对这些受试者进行统计研究，并检验其在慢性高血压模型、缺血再灌注模型等各种青光眼模型中的效果。