ES細胞の試験管内発生モデルを用いた造血幹細胞の多分化能獲得機構の研究

利用ES细胞体外发育模型研究造血干细胞获得多能性的机制

• 批准号: 15790495
• 负责人: 坂本 比呂志
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790495/
• 关键词: c-myb; 成体型造血; 血管内皮細胞細胞; 赤血球; B細胞; c-Myb; ES細胞

c-mybは多分化能を有する成体型造血機能の発生において重要な機能をはたしており、その遺伝子破壊マウスは胎生12日前後に貧血により死亡する。そこで、このc-mybの成体型造血における機能を解析するために、テトラサイクリンによるc-myb(p75)遺伝子発現誘導可能なES細胞株をc-mybノックアウトES細胞から樹立した(c-mybTet/KO)。このc-mybTet/KOは、c-mybの発現により血液細胞を発生するが、その血球成分には異常が観られた。顆粒球やマクロファージは正常に発生するが、赤血球への分化はCD71^<high>Ter119^-の段階で停止していた。野生型ES細胞では、CD71highTer119^-からCD71^<high>Ter119^+の段階においてc-mybの発現は大きく減少していた。しかし、c-mybTet/KOは、c-mybの強制発現によりCD71^<high>Ter119^+の段階でのc-mybが上昇し、GATA2の発現上昇を誘導していた。また、赤血球の分化に必須なGATA1は変化していなかった。このc-mybTet/KOからはB細胞(CD19^+B220^+)が発生しない。CD43^+B220^+細胞は僅かに存在するが、CD127の発現は観察されなかった。この結果から、リンパ球へのコミットメントが阻害されていると考えられた。c-mybには先に用いたp75とともにp89の分子もアイソフォームとして存在する。このp89c-mybはp75とは異なった機能を有していると報告されている。さらにp89は造血機能を有する中胚葉や血管内皮細胞にp75と共に発現していることが確認できている。そこで、先のリンパ球へのコミットメントにp89が重要な機能を果たしているとの仮説からp89をc-myb遺伝子破壊ES細胞に発現させたES細胞を樹立し、リンパ球分化への影響を中心に解析を現在行っている。

C-MYB是具有多元潜力的成年造血功能的发展，并且基因降低的小鼠死于贫血大约12天的胚胎寿命。因此，为了分析C-MYB在成年造血剂中的功能，从C-MYB敲除ES细胞（C-MybTET/KO）建立了能够通过四环素诱导C-MYB（P75）基因表达的ES细胞系。该c-mybtet/ko通过C-MYB的表达产生血细胞，但是观察到血细胞成分的异常。粒细胞和巨噬细胞正常发展，但在CD71^<high> Ter119^ - 阶段停止了红细胞的分化。在野生型ES细胞中，C-MYB表达在CD71Highter119^ - 至CD71^<high> Ter119^+阶段中显着降低。然而，c-mybtet/ko正在诱导CD71^<high> Ter119^+阶段的C-MYB表达增加，从而诱导GATA2表达的增加。此外，GATA1对于红细胞分化至关重要，没有改变。该c-mybtet/ko没有B细胞（CD19^+B220^+）。尽管CD43^+ B220^+细胞很少，但未观察到CD127的表达。该结果表明对淋巴细胞的承诺受到抑制。 C-MYB还具有p89的分子作为同工型，以及先前使用的p75。据报道，该P89C-MYB具有与P75不同的功能。此外，已经证实，p89与造血功能和血管内皮细胞中的中胚层中的p75一起表达。因此，我们建立了在ES细胞中表达p89的ES细胞，该细胞破坏了p89 c-MYB基因，基于以下假设：p89在对淋巴细胞的承诺中起着重要功能，目前正在进行分析，重点是对淋巴细胞分化的影响。

项目成果

Cell adhesion to ephrinb2 is induced by EphB4 independently of its kinase activity.

EphB4 诱导细胞对 ephrinb2 的粘附，与其激酶活性无关。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 27
• 作者: Sakamoto H;Zhang XQ;Suenobu S;Ohbo K;Ogawa M;Suda T.
• 通讯作者: Suda T.