造血幹細胞・血管新生のシグナル伝達をふくむ分子論的研究
造血干细胞信号转导和血管生成等分子研究
基本信息
- 批准号:01J00388
- 负责人:
- 金额:$ 1.54万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2001
- 资助国家:日本
- 起止时间:2001 至 2002
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
チロシンキナーゼは血管新生および造血機能においても重要な働きをしている。なかでも、Ephは哺乳類において巨大なチロシンキナーゼファミリーを形成し、各メンバーの遺伝子破壊マウス(KO)は個体発生の段階においてEphが様々な働きをしていることを示している。EphB4 KOおよびそのリガンドであるEphrinB2 KOは血管の形成異常による胎生致死を示す。EphB4は血管内皮細胞のみならず赤血球の発生段階においても、その発現が赤芽球のBFU-Eに一時的に観察される。そこで、我々はEphB4の赤血球産生における役割を検討するために浮遊細胞を用いた検討を行った。GM-CSF依存性赤白血病細胞株UT-7/GMは内因性にEphB4を発現しており、濃度依存的にEphrinB2をコートしたディッシュに接着し、フィロポディアが亢進した。またEphrinB2はフィブロネクチンによる接着を相加的に亢進し、他のEphメンバーで報告されている接着の阻害を示さなかった。さらに、このフィブロネクチンへの接着機能亢進作用は、EphrinB2を可溶化状態で刺激した際にも観察され、細胞内からの細胞接着機能への調節作用が考えられた。そこで内因性にEphB4を発現していないIL3依存性pro-B細胞株Ba/F3に、EphB4の野生型(EphB4wt)および各種変異型を安定発現させた細胞株を樹立した。EphB4wt発現Ba/F3 (EphB4wt/BF)はUT-7/GMと同様にEphrinB2濃度依存的に接着した。この接着は、チロシンキナーゼ活性を失活させた変異型EphB4発現株(EphB4KD/BF)および細胞内領域を欠損させたEphB4発現株(EphB4dC/BF)においても観察された。また、EPhrinB2依存的な接着時のフィロポディアの形成も、EphB4wt、EphB4KDおよびEphB4dCのすべてで認められた。そこで、次にEphB4による細胞内分子の変化を検討した。UT-7/GMにおいて各種分子のチロシンリン酸化とともに、c-Cblのリン酸化は亢進しCrkLと会合した。EphB4wt/BFおよびEphB4KD/BFにおいても、このEphrinB2依存的なCrkLとc-Cblの結合が観察された。以上の結果から、EphB4は、EphrinB2依存的な接着を示し、その接着はEphB4の細胞内領域に依存していないことが示された。
酪氨酸激酶在血管生成和造血功能中也起着重要作用。其中,EPH在哺乳动物中形成了一个巨大的酪氨酸激酶家族,每个成员基因干扰小鼠(KOS)表明,EPH在本体发育阶段执行了多种功能。 Ephb4 KO及其配体Ephrinb2 KO由于血管发育不良而表现出胎儿致死性。 EPHB4的表达在红细胞中暂时观察到BFU-E,不仅在血管内皮细胞中,而且在红细胞的发育阶段。因此,我们使用浮动细胞研究了EPHB4在红细胞生产中的作用。 GM-CSF依赖性红血症细胞系UT-7/GM内源性表达Ephb4,并以浓度依赖性的方式粘附在ephrinb2涂层的菜肴上,从而导致植物植物增加。此外,ephrinb2添加性增强了纤连蛋白的粘附,并且没有显示出其他EPH成员报道的粘附的任何抑制作用。此外,当在溶解的状态下刺激ephrinb2时,还观察到对纤连蛋白的这种高粘附作用,并且人们认为它对细胞内部的细胞粘附功能具有调节作用。因此,在IL3依赖性的pro-B细胞系BA/F3中建立了稳定表达野生型(EPHB4WT)和各种突变形式EPHB4的细胞系,该细胞系没有内源性表达EPHB4。表达EPHB4WT的BA/F3(EPHB4WT/BF)以EPHRINB2浓度依赖性方式粘附,类似于UT-7/gm。在突变的EPHB4表达菌株(EPHB4KD/BF)中还观察到这种粘附,该菌株灭活了酪氨酸激酶活性,以及具有细胞内区域的EPHB4表达菌株(EPHB4DC/BF)。另外,在所有EPHB4WT,EPHB4KD和EPHB4DC中都观察到了粘附后植物上的Ephrinb2依赖性形成。因此,我们接下来研究了由EPHB4引起的细胞内分子的变化。在UT-7/gm中,C-CBL的磷酸化与各种分子的酪氨酸磷酸化一起增强,并与CRKL相关。在EPHB4WT/BF和EPHB4KD/BF中,还观察到了CRKL和C-CBL的Ephrinb2依赖性结合。上述结果表明,EPHB4表现出依phrinb2依赖性粘附,并且粘附不依赖于Ephb4的细胞内区域。
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)

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数据更新时间:2024-06-01
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