気管支喘息の増悪因子としてのマイコプラズマ感染とTLRの関与

支原体感染和 TLR 参与是支气管哮喘的加重因素

基本信息

批准号：
15790414
负责人：
千葉弘文
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790414/
关键词：
mycoplasma surfactant protein A lipoprotein toll like receptor CD14 気管支喘息マイコプラズマ Toll like receptor サーファクタントプロテイン

项目摘要

<実験1:ヒト気道上皮細胞における検討>ヒトmonocyte由来のcell line U937とrat alveolar macrophageを用い,M.pneummoniae membraneまたはlipoproteinを曝露後,mediaを回収し,TNF-αまたNitric oxide産生を計測する。<実験2:肺コレクチンの調節機構の検討>U937細胞またはrat alveolar macrophageにM.pneumoniae曝露後,肺コレクチンSP-Aを加えTNF-α,NOの産生における肺コレクチンの影響を検討する。<実験3:マイコプラズマ認識分子の検討>HEK293 cellにToll like receptor2またはCD14 transfectant geneをtransfectしmycoplasma lipoproteinを加えた時のNFk-Bのactivationをluciferase活性によって計測する。<実験4:マイコプラズマ増幅に対するSP-Aの直接的影響の検討>マイコプラズマ培養液中にSP-Aを加え、増殖に対する影響を検討する。結果実験1:mycoplasma membraneとripoproteinを加えたいずれの場合においてもTNF-αとNOの産生が濃度依存性に誘導された。さらに同量のmembraneとlipoproteinを加えた場合lipoproteinの方が産生誘導において優っていた。このことからmembrane中のlipoproteinが炎症反応を惹起する生理活性物質であることが示唆された。実験2:実験1で示したmycoplasma誘導細胞応答に対してさらにSP-Aを加えると細胞応答がSP-Aの濃度に依存して増強されることが示された。実験3:TLR2 cDNAをtransfectしたHEK293細胞はmycoplasma lipoproteinに対してNFk-Bの活性化を惹起する。さらにCD14 cDNAをco-transfectした場合、NFk-Bの活性化が増強された。このことからmycoplasma感染において、その認識に宿主側のTLR2,CD14が受容体として関与していることが示唆された。実験4:マイコプラズマ培養液中にSP-Aを加えるとその加えた濃度に依存して、コロニー形成、菌体によるthymidineの取り込みが抑制され、増殖が抑えられることが示された。

<实验1：人呼吸道上皮细胞的研究> 使用人单核细胞来源的细胞系U937和大鼠肺泡巨噬细胞，在暴露肺炎支原体膜或脂蛋白后，收集培养基并测量TNF-α和一氧化氮的产生。 <实验2：考察肺集合素的调节机制> U937细胞或大鼠肺泡巨噬细胞暴露于肺炎支原体后，加入肺集合素SP-A，考察肺集合素对TNF-α和NO产生的影响。 <实验3：支原体识别分子的检查> 当用Toll样受体2或CD14转染子基因转染HEK293细胞并添加支原体脂蛋白时，通过荧光素酶活性测量NFk-B的活化。 <实验4：考察SP-A对支原体扩增的直接影响> 将SP-A添加到支原体培养液中，考察其对增殖的影响。结果实验1：在添加支原体膜和脂蛋白的两种情况下，均以浓度依赖性方式诱导TNF-α和NO的产生。此外，当添加等量的膜和脂蛋白时，脂蛋白在诱导生产方面更优越。这表明膜中的脂蛋白是诱导炎症反应的生理活性物质。实验2：结果表明，当在实验1所示的支原体诱导的细胞反应中进一步添加SP-A时，细胞反应根据SP-A的浓度而增强。实验3：用TLR2 cDNA转染的HEK293细胞诱导针对支原体脂蛋白的NFk-B激活。此外，与 CD14 cDNA 共转染增强了 NFk-B 激活。这表明宿主侧的TLR2和CD14作为受体参与支原体感染的识别。实验4：结果表明，当将SP-A添加到支原体培养液中时，根据添加浓度，细菌细胞的集落形成和胸苷摄取受到抑制，并且增殖受到抑制。