劇症型溶レン菌感染症起因菌が産生するホスホリパーゼA2の病原因子としての機能

引起暴发性链球菌感染的细菌产生的磷脂酶A2作为致病因子的功能

基本信息

批准号：
15790234
负责人：
池辺忠義
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までの研究から、Streptococcus pyogenesのゲノム上にコードされているフォスフォリパーゼ様のタンパク質PLA_2(Sla)が、マウスの筋肉細胞に対して細胞障害活性があることを確認した。Streptococcus pyogenes由来のPLA_2をコードするsla遺伝子の突然変異株を用いて、どの組織由来の細胞に作用するかを調べるため、ヒト由来の様々な培養細胞(肺上皮細胞(A549)、横紋筋細胞(A673)、喉頭上皮細胞(CCL-138)、肝臓上皮細胞(HepG2))を用い、細胞特異性を調べたが、野性株あるいは突然変異株を各細胞へ感染させたとき明らかな変化は見られなかった。本年度の研究では、sla遺伝子産物が分泌される培養条件およびsla遺伝子産物の最適pHなどの活性化条件の検討を行った。活性化の条件は、細胞が破壊した場合に培養液中に流出する細胞内タンパク質であるLactate dehydrogenaseの活性を指標として測定した。最適pHを調べるため、培地をpH6.5〜8.5に調整し、増殖した培養細胞の培地交換をし、酵素を添加した。この酵素を培養細胞へ添加した結果、pH7.0とpH8.5でLactate dehydrogenaseの活性が上昇した。しかしながら、pH6.5,pH7.5,pH8.0では、Lactate dehydrogenaseの活性が減少した。これらの結果から、この酵素は、pH7.0とpH8.5で細胞障害活性をもつことが示唆された。

去年进行的研究证实，化脓性链球菌基因组中编码的磷脂酶样蛋白 PLA_2 (Sla) 对小鼠肌肉细胞具有细胞毒活性。链球菌属使用源自化脓菌的编码 PLA_2 的 sla 基因突变株，我们测试了各种人类来源的培养细胞（肺上皮细胞 (A549)、横纹肌细胞），以研究其作用于哪些组织来源的细胞。 (A673)、喉上皮细胞(CCL-138)和肝上皮细胞(HepG2))，但当每个细胞被野生株或突变株感染时，没有观察到明显的变化。在今年的研究中，我们研究了sla基因产物分泌的培养条件以及sla基因产物的最适pH等激活条件。使用乳酸脱氢酶的活性作为指标来测量激活条件，乳酸脱氢酶是一种细胞内蛋白质，当细胞被破坏时，该蛋白质会流出到培养基中。为了确定最适pH，将培养基的pH调节至6.5至8.5，用培养基更换已生长的培养细胞，并添加酶。当将该酶添加到培养的细胞中时，乳酸脱氢酶的活性在pH 7.0和pH 8.5下增加。然而，乳酸脱氢酶的活性在pH6.5、pH7.5和pH8.0时降低。这些结果表明该酶在 pH 7.0 和 pH 8.5 下具有细胞毒活性。