G群レンサ球菌による劇症型感染症の分子基盤

G族链球菌引起的暴发性感染的分子基础

基本信息

批准号：
21K07034
负责人：
池辺忠義
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

劇症型溶血性レンサ球菌感染症（STSS）患者分離株で変異のあった遺伝子が、病原遺伝子の発現の上昇に影響を与えているか確かめるため、STSS患者分離株に咽頭炎患者分離株のintactの遺伝子を持つプラスミドを導入した。導入した株からRNAを抽出し、RT-PCRにより遺伝子の発現量を定量した。STSS患者分離株にintactの遺伝子を導入することで、病原遺伝子の発現が咽頭炎患者分離と同じレベルになった遺伝子を選択した。選択した遺伝子の変異により、病原遺伝子の発現が上昇するか調べるため、欠失変異体を作製した。変異株の作製には、pJRS233あるいはpSET4sを用いた。咽頭炎患者分離株がもつ目的遺伝子の破壊株を作製し、RNAを抽出した。これをRT-PCRにより発現量を定量し、STSS患者分離株でみられた目的の病原遺伝子の発現量の増加があるか確認した。これら遺伝子相補実験および遺伝子破壊実験で病原遺伝子の発現量の減少、増加が見られた遺伝子を原因遺伝子と決定した。臨床分離株における原因遺伝子の変異頻度をしらべるため、同定した原因遺伝子について、G群レンサ球菌臨床分離株79株について原因遺伝子の塩基配列を決定した。塩基配列を決定したのち、アミノ酸配列に翻訳して変異領域のマップを作製した。ゲノムワイドな遺伝子発現制御解析をするため、咽頭炎患者分離株、咽頭炎患者分離株の原因遺伝子を変異させた株、変異を既に見出している遺伝子を変異させた株からRNAを抽出し、RNA-seqを行った。咽頭炎患者分離株の発現量より咽頭炎患者分離株の原因遺伝子を変異させた株において発現量が高いものを同定した。

STSS患者在STS中分离的STSS患者的完整，以确认突变受到剧烈的Lensacocococococococococococcal感染（STSS）患者分离（STSS）的基因。从引入的菌株中提取RNA，并量化了RT-PCR的基因量。通过在STSS患者分离中引入完整的基因，选择致病基因表达的基因与咽炎患者的水平相同。创建了删除的变体来检查病原基因的表达是否由于选定的基因突变而升高。 PJRS233或PSET4用于生产突变库存。目的基因的破坏性菌株是通过咽炎患者分离产生的，并提取了RNA。 RT-PCR对此进行了量化，以查看STSS患者分离库存中所需的致病基因量是否增加。这些基因期和基因破坏实验被确定为病因基因，该基因已下降并增加了致病基因的表达。为了检查临床分离库存中的因果基因的频率，确定了鉴定出的致病基因的79镜葡萄球菌分离库存的致病基因的基础序列。确定碱基序列后，通过将其转化为氨基酸序列而产生突变区域的图。为了进行基因组 - 基因表达控制分析，从咽部炎分离中提取RNA，它们已与已经发现的突变突变，这些突变已突变。从咽炎患者分离的量中鉴定出咽炎患者分离库存的病因基因的股份。