IL-18による破骨細胞分化制御の分子機構の解明

阐明IL-18破骨细胞分化调控的分子机制

基本信息

批准号：
15790206
负责人：
山田直子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790206/
关键词：
破骨細胞 IL-18 RANKL マクロファージ IFN-gamma

项目摘要

我々はこれまでに、IL-18が破骨細胞に直接作用し、骨吸収活性を抑制することを明らかにした。また、破骨細胞の分化におけるIL-18の作用は、単独又はIL-12と協調してT細胞に作用して破骨細胞の分化を抑制することが報告されている。我々はT細胞を介さないIL-18の破骨細胞分化に対する作用を解析するためにマウス骨髄細胞をM-CSF(100ng/ml)添加培養して分化させたM-CSF依存性マクロファージを単離し、M-CSF(25ng/ml)とRANKL(25ng/ml)の存在下で破骨細胞を分化させる系を実験に用いた。本研究の目的はこの分化誘導系を用いて破骨細胞分化過程におけるIL-18の破骨細胞前駆細胞への直接作用とその分子機構を解明することである。この分化誘導系を用いるとIL-18(100ng/ml)単独刺激では破骨細胞前駆細胞に直接作用して破骨細胞分化を促進し、IL-18(10ng/ml)とIL-12(10ng/ml)の共刺激では破骨細胞分化を抑制した。IL-18とIL-12の共刺激による破骨細胞分化抑制は、IFN-γノックアウトマウスを用いることでIFN-γを介することが示された。そこでIL-18による単独刺激による破骨細胞分化促進作用を調べた。RT-PCR法によりIFN-β、TNF-α、IL-3の発現量は増加、IFN-γ、GM-CSF、IL-1、IL-6は変化しなかった。さらにIFN-γ及びTNF-αノックアウトマウスから単離したマクロファージを用いた場合では、破骨細胞分化にIL-18による影響は無かった。またプロテインアレイシステムにより培養上清中の18種類のサイトカイン濃度を測定すると、IL-12(p40),KC, RANTESの分泌量がわずかに増加していた。IL-18単独刺激による破骨細胞分化促進作用に関与するサイトカインを見つけることはできなかった。しかしIL-18により誘導されたTRAP^+破骨細胞は単核細胞が増加していることから、IL-18は細胞増殖と生存に関与していると推測される。

我们先前已经表明，IL-18直接作用于破骨细胞并抑制骨吸收活性。还据报道，IL-18对破骨细胞分化的影响单独或与IL-12结合使用以抑制破骨细胞分化。为了分析IL-18对无T细胞的破骨细胞分化的影响，我们分离了M-CSF依赖性巨噬细胞，其中通过添加M-CSF（100 ng/ml）来区分小鼠骨髓细胞，并使用了一个系统，在该系统中使用M-CSF（25 ng/ml）和各个等级（25 ng）（25 ng）（25 ng）（25 ng）。这项研究的目的是阐明在破骨细胞分化过程及其分子机制中IL-18对破骨细胞祖细胞的直接作用。使用这种分化诱导系统，单独刺激IL-18（100 ng/ml）直接作用于破骨细胞祖细胞，以促进破骨细胞分化，而IL-18（10 ng/ml）和IL-12（10 ng/ml）的cotal抑制了抑制了抑制的骨质细胞分化。通过使用IFN-γ基因敲除小鼠，通过共刺激IL-18和IL-12对破骨细胞分化的抑制作用显示通过IFN-γ。因此，我们研究了IL-18刺激以促进破骨细胞分化的作用。 RT-PCR增加了IFN-β，TNF-α和IL-3的表达水平，而IFN-γ，GM-CSF，IL-1和IL-6则没有改变。此外，当使用从IFN-γ和TNF-α基因敲除小鼠中分离出的巨噬细胞时，IL-18对破骨细胞分化没有影响。此外，当使用蛋白质阵列系统测量培养上清液中18种类型的细胞因子浓度时，IL-12（p40），KC和Rantes的分泌略有增加。我们找不到单独通过IL-18刺激来促进破骨细胞分化的任何细胞因子。但是，由于IL-18诱导的诱捕剂^+破骨细胞中的单核细胞数量增加了，因此推测IL-18参与细胞增殖和存活。