IL-18による破骨細胞分化制御の分子機構の解明

阐明IL-18破骨细胞分化调控的分子机制

基本信息

批准号：
15790206
负责人：
山田直子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790206/
关键词：
破骨細胞 IL-18 RANKL マクロファージ IFN-gamma

项目摘要

我々はこれまでに、IL-18が破骨細胞に直接作用し、骨吸収活性を抑制することを明らかにした。また、破骨細胞の分化におけるIL-18の作用は、単独又はIL-12と協調してT細胞に作用して破骨細胞の分化を抑制することが報告されている。我々はT細胞を介さないIL-18の破骨細胞分化に対する作用を解析するためにマウス骨髄細胞をM-CSF(100ng/ml)添加培養して分化させたM-CSF依存性マクロファージを単離し、M-CSF(25ng/ml)とRANKL(25ng/ml)の存在下で破骨細胞を分化させる系を実験に用いた。本研究の目的はこの分化誘導系を用いて破骨細胞分化過程におけるIL-18の破骨細胞前駆細胞への直接作用とその分子機構を解明することである。この分化誘導系を用いるとIL-18(100ng/ml)単独刺激では破骨細胞前駆細胞に直接作用して破骨細胞分化を促進し、IL-18(10ng/ml)とIL-12(10ng/ml)の共刺激では破骨細胞分化を抑制した。IL-18とIL-12の共刺激による破骨細胞分化抑制は、IFN-γノックアウトマウスを用いることでIFN-γを介することが示された。そこでIL-18による単独刺激による破骨細胞分化促進作用を調べた。RT-PCR法によりIFN-β、TNF-α、IL-3の発現量は増加、IFN-γ、GM-CSF、IL-1、IL-6は変化しなかった。さらにIFN-γ及びTNF-αノックアウトマウスから単離したマクロファージを用いた場合では、破骨細胞分化にIL-18による影響は無かった。またプロテインアレイシステムにより培養上清中の18種類のサイトカイン濃度を測定すると、IL-12(p40),KC, RANTESの分泌量がわずかに増加していた。IL-18単独刺激による破骨細胞分化促進作用に関与するサイトカインを見つけることはできなかった。しかしIL-18により誘導されたTRAP^+破骨細胞は単核細胞が増加していることから、IL-18は細胞増殖と生存に関与していると推測される。

我们已经揭示了IL-18直接作用于骨病细胞并抑制骨吸收活性。还据报道，IL-18对骨细胞细胞分化的影响与IL-12合作以通过作用在T细胞上作用，以抑制骨细胞的分化。我们是从M-CSF依赖性的巨噬细胞中分离出来的，通过添加M-CSF（100 ng/ml），它们被添加并区分了，以分析对IL-18的骨细胞分化的影响，这些影响不是通过T细胞。在M-CSF（25 ng/ml）和RANKL（25 ng/ml）的存在下，将分化骨骨的系统用于实验。这项研究的目的是利用这种分化感应系统来阐明对骨细胞细胞分化过程及其分子机制中对骨细胞前体细胞的直接影响。使用这种分化诱导系统，单独使用IL-18（100 ng/ml）刺激骨细胞细胞以促进骨细胞分化，而IL-18（10 ng/ml）和IL-12（10 ng）（10 ng）。刺激 /mL）抑制骨细胞分化。通过使用IFN-γ基因敲除小鼠，由于IL-18和IL-12的共共刺激而抑制骨细胞细胞分化是通过IFN-γ的。因此，我们通过IL-18的单个刺激检查了骨细胞细胞分化的促进效应。根据RT-PCR方法，IFN-β，TNF-α和IL-3表达没有变化，IFN-γ，GM-CSF，IL-1和IL-6也没有改变。此外，当从IFN-γ和TNF-α基因敲除小鼠中分离巨噬细胞时，骨细胞分化对骨细胞细胞没有影响。当蛋白质阵列系统测量过度培养物中的18种细胞因子浓度时，IL-12（p40），KC和Rantes的量略有增加。无法通过单独的IL-18刺激找到涉及骨细胞分化促进效应的细胞因子。然而，假定IL-18参与细胞增殖和存活，因为IL-18诱导的陷阱^+破骨细胞的单调细胞增加。