臨床応用への展開を目指すEGFRを標的とした組換え型ヒト型化diabodyの構築

靶向EGFR的重组人源化双抗体的构建及临床应用

基本信息

批准号：
15760582
负责人：
浅野竜太郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15760582/
关键词：
巻き戻し二重特異性抗体 diabody EGFR CD3 ヒト型化 IL-21 抗腫瘍効果

项目摘要

本研究は、当研究室により世界で初めて巻き戻しによる調製に成功した最小の組換え型二重特異性抗体(diabody)の中で、極めて高い抗腫瘍効果を示した上皮増殖因子受容体(EGFR)を標的としたEx3 diabody(Ex3)の医用へのより現実的展開を目的としている。今年度は、1.ヒト型化Ex3の機能改変と評価、2.抗腫瘍エンハンス分子融合Ex3の機能評価、3.Ex3の強力な傷害性に関与する因子、作用機序の解明、の観点から研究を進めた。実績は以下の通りである。(1)前年度作製したヒト型化Ex3を各種機能評価を行った結果、著しい活性の低下が見られた。そこで、機能回復のために直接抗原結合に関与しない残基に変異を導入した10種の変異体を作製したところ、いくつかに活性の回復が見られたため、その中で最もヒト由来配列の多いものをヒト型化Ex3とした。ヒト型化前のEx3とのすべての比較実験において、同等の効果を示し、またマウスを用いたin vivo治療実験でも延命効果が見られたことからもヒト型化Ex3の構築に成功したと言える。(2)昨年度構築した、等研究室で全合成法により構築した抗腫瘍サイトカインIL-21との融合Ex3(IL-21-Ex3)の機能評価を行ったところ、予期しない著しい活性の低下が見られた。この事は、Ex3の末端部位が構造形成、あるいは強力な活性に必要であることを示唆する重要な知見である。(3)蛍光試薬を用いた経時変化観察により、Ex3はアポトーシスを誘導するような働きがあることが分かった。またチロシンキナーゼの阻害能も調べたところ傷害性との相関が見られなかった。即ちチロシンキナーゼの阻害による成長阻害よりもEx3は明らかに早い傷害性を誘導しているという、既存の分子標的治療薬とは異なる作用機序を示唆する結果を得た。

本研究以我们实验室在世界上首次通过解旋成功制备的最小重组双特异性抗体（双抗体）中表现出极高抗肿瘤效果的表皮生长因子受体（EGFR）为目标。更现实地开发用于医疗用途的Ex3双抗体（Ex3）。今年，我们将重点关注1.人源化Ex3的功能修饰和评价，2.抗肿瘤增强分子融合Ex3的功能评价，3.阐明Ex3强毒性的影响因素和作用机制。我继续我的研究。结果如下。 (1)对前一年生产的人源化Ex3进行各种功能评价的结果，观察到活性显着下降。因此，为了恢复功能，我们创建了10个突变体，其中将突变引入到不直接参与抗原结合的残基中，其中一些显示出活性的恢复，并将其人源化为Ex3。可以说，人源化Ex3的构建是成功的，因为它在与预人源化Ex3的所有对比实验中表现出相同的效果，并且在使用小鼠的体内治疗实验中也表现出存活效果。 (2)当我们对我们实验室去年通过全合成方法构建的融合Ex3（IL-21-Ex3）与抗肿瘤细胞因子IL-21进行功能评估时，我们发现了一个意想不到的重要结果活动减少了。这是一个重要的发现，表明 Ex3 的末端区域对于结构形成或强活性是必需的。 (3)利用荧光试剂观察随时间的变化，发现Ex3具有诱导细胞凋亡的能力。还研究了抑制酪氨酸激酶的能力，未发现与毒性的相关性。换句话说，我们获得的结果表明其作用机制不同于现有的分子靶向疗法，其中Ex3明显比酪氨酸激酶抑制引起的生长抑制更快地产生毒性。