バンコマイシン耐性腸球菌のバシトラシン耐性化阻害法の開発

一种抑制耐万古霉素肠球菌杆菌肽耐药性的方法的研制

基本信息

批准号：
03J09389
负责人：
津田啓方
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではStreptococcus mutans (Sm)のバシトラシン耐性に関与している遺伝子を同定し、それらの遺伝子産物によるSmのバシトラシン耐性メカニズムとそれらの遺伝子産物の発現調節機構を分子レベルで解明し、バシトラシン耐性菌の出現に対する対処法の可能性を検討することを目的としている。昨年までにバシトラシン耐性に関与しているmbr領域とrgp領域を決定し、それらの遺伝子が独立した機構によりSmにバシトラシン耐性を付与していることを示した。また、mbrAB遺伝子の発現誘導がSmのバシトラシン耐性獲得に最も重要であることを示した。本年度は、まず、mbrC、mbrDの欠失変異株のバシトラシン作用時における遺伝子発現変化をリアルタイムRT-PCR法で調べた。それによると、mbrCD欠失株においてmbrABは発現誘導されなかった。これにより、mbrCDがmbrABの発現誘導に関与している事が示唆された。また、バシトラシン作用時に5倍以上発現誘導された遺伝子については、mbrCの欠失では発現誘導が抑えられたが、mbrD欠失では弱く発現誘導していた。それらの遺伝子はmbrCによって発現誘導が制御されているが、mbrDにはあまり関係ないかあるいはmbrD以外のものに発現制御されている可能性があることが示唆された。これらのことから、mbr遺伝子とその産物がSmのバシトラシン耐性機構抑制のターゲットとなりうることが示唆された。それらのリコンビナント蛋白を大腸菌にて作成し、それらの分子レベルの性質を調べようといろいろ試みたが、mbrC以外のリコンビナント蛋白の作成は困難であった。

这项研究旨在鉴定链球菌突变（SM）中涉及杆状激素耐药性的基因，阐明了SM中杆状激素耐药性的机制，以及在分子水平上调节这些基因产物的表达调节机制，并研究可能对杆菌素 - 抑制细菌的可能对策。直到去年，确定了参与细菌蛋白耐药性的MBR和RGP区域，表明这些基因通过独立的机制赋予SM抗SM抗杆菌素的能力。还已经表明，MbrAB基因表达的诱导对于在SM中获得杆菌蛋白耐药性最为重要。今年，我们首先使用实时RT-PCR研究了MBRC和MBRD缺失突变体中基因表达的变化。根据此，MBRCD缺失菌株中未诱导MBRAB的表达。这表明MBRCD参与诱导MBRAB表达。此外，对于在杆状激素作用过程中由细菌蛋白在5倍或以上诱导的基因而言，MBRC的缺失抑制了表达诱导，但是MBRD的缺失会弱诱导表达。尽管这些基因的表达诱导是由MBRC控制的，但建议它们可能与MBRD无关，或者可能由MBRD以外的其他物质控制。这些结果表明，MBR基因及其产物可能是抑制SM的杆菌抗性机制的靶标。这些重组蛋白是在大肠杆菌中创建的，并试图研究其分子特性，但是很难创建除MBRC以外的重组蛋白。