マイクロアレイを用いた心肥大・心不全時および心筋発生初期の遺伝子解析

使用微阵列对心脏肥大、心力衰竭和早期心肌发育进行遗传分析

• 批准号: 14770331
• 负责人: 田原 聰子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Dental College (2003)Keio University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770331/
• 关键词: 心肥大; TSC-22; アンチセンス; マイクロアレイ; エンドセリン-1; Four and Half LIM protein

1.in houseマイクロアレイを用いた心肥大刺激による心筋細胞内遺伝子発現の検討0〜3日齢の新生児ラット培養心筋細胞(パーコール法にて精製したもの)を心肥大因子endothelin-1(以下ET-1:10^<-7>M)で刺激し、刺激後0,2,6,12,24時間におけるtotalRNAを抽出した。同時間経過の無刺激心筋細胞のtotalRNAも抽出し、発現遺伝子の差をin house心臓特異的マイクロアレイを用いて検討した。同アレイの特色は、1.心臓cDNAライブラリーから作成した臓器特異的アレイであること、2.サブトラクションを用いてredundancyを取り除くことにより心筋における発現量の比較的低い遺伝子も載っていること、などがある。各時間における遺伝子発現の差を時間経過でプロファイリングした結果、注目すべき遺伝子が認められた。TSC-22と呼ばれる遺伝子は、これまで特殊な癌細胞においては増殖抑制作用を持つことが報告されてきたが、心筋細胞を含めた正常細胞におけるその生理作用、生体内機能については知られていない。マイクロアレイ解析の結果、ET-1刺激によりTSC-22の発現亢進が認められたため、この遺伝子に注目し、他の心肥大因子による発現を検討したところ、phenylephrineやCT-1などすべての心肥大因子により発現亢進を認めた。In vivoでの発現検討のため、monocrotalinによる右心肥大モデルの心筋を検討したところ、TSC-22の顕著な発現亢進を認めた。TSC-22の心肥大における機能解析のため、TSC-22のアデノウイルスを作成し、培養心筋細胞に感染させた。コントロール群と比較し、心筋細胞形態の変化は認められず、肥大抑制あるいは亢進作用も認められなかった。TSC-22のアンチセンスオリゴによる発現抑制にて心筋細胞の肥大における機能を現在検討中である。

1。使用内部微阵列通过心脏肥大刺激检查心肌细胞基因表达。用心脏肥大因子内皮蛋白-1（以下称为ET-1：10^<-7> m）刺激新生大鼠（通过Percoll方法纯化）培养的心肌细胞，并在刺激后的0、2、6、12、12和24小时提取总RNA。还提取了同一时间过程中未刺激的心肌细胞的总RNA，并使用内部心脏特异性微阵列检查了表达基因的差异。该数组的特征包括：1。它是由心脏cDNA库产生的器官特异性阵列，以及2。它还包含心肌中表达水平相对较低的基因，通过使用减法消除冗余。随着时间的流逝，每次都介绍了基因表达的差异，并发现了感兴趣的基因。据报道，称为TSC-22的基因在特殊癌细胞中具有增殖抑制作用，但是其生理作用和体内功能在包括心肌细胞在内的正常细胞中的体内功能尚不清楚。微阵列分析表明，TSC-22通过ET-1刺激增加了表达，当我们专注于该基因并通过其他心脏肥大因子检查表达时，我们发现它通过所有心脏肥大因子（包括苯肾上腺素和CT-1）提高了表达。对于体内表达，当在由单蛋白蛋白引起的右心脏肥大模型中检查心肌时，我们发现TSC-22的表达显着增加。为了对TSC-22心脏肥大的功能分析，创建了TSC-22的腺病毒，并用培养的心肌细胞感染。与对照组相比，未观察到心肌细胞形态的变化，也未观察到肥大。目前正在研究反义寡素的抑制TSC-22的表达，目前正在研究心肌细胞肥大的功能。