マイクロアレイを用いた心肥大・心不全時および心筋発生初期の遺伝子解析

使用微阵列对心脏肥大、心力衰竭和早期心肌发育进行遗传分析

• 批准号: 14770331
• 负责人: 田原 聰子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Dental College (2003)Keio University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770331/
• 关键词: 心肥大; TSC-22; アンチセンス; マイクロアレイ; エンドセリン-1; Four and Half LIM protein

1.in houseマイクロアレイを用いた心肥大刺激による心筋細胞内遺伝子発現の検討0〜3日齢の新生児ラット培養心筋細胞(パーコール法にて精製したもの)を心肥大因子endothelin-1(以下ET-1:10^<-7>M)で刺激し、刺激後0,2,6,12,24時間におけるtotalRNAを抽出した。同時間経過の無刺激心筋細胞のtotalRNAも抽出し、発現遺伝子の差をin house心臓特異的マイクロアレイを用いて検討した。同アレイの特色は、1.心臓cDNAライブラリーから作成した臓器特異的アレイであること、2.サブトラクションを用いてredundancyを取り除くことにより心筋における発現量の比較的低い遺伝子も載っていること、などがある。各時間における遺伝子発現の差を時間経過でプロファイリングした結果、注目すべき遺伝子が認められた。TSC-22と呼ばれる遺伝子は、これまで特殊な癌細胞においては増殖抑制作用を持つことが報告されてきたが、心筋細胞を含めた正常細胞におけるその生理作用、生体内機能については知られていない。マイクロアレイ解析の結果、ET-1刺激によりTSC-22の発現亢進が認められたため、この遺伝子に注目し、他の心肥大因子による発現を検討したところ、phenylephrineやCT-1などすべての心肥大因子により発現亢進を認めた。In vivoでの発現検討のため、monocrotalinによる右心肥大モデルの心筋を検討したところ、TSC-22の顕著な発現亢進を認めた。TSC-22の心肥大における機能解析のため、TSC-22のアデノウイルスを作成し、培養心筋細胞に感染させた。コントロール群と比較し、心筋細胞形態の変化は認められず、肥大抑制あるいは亢進作用も認められなかった。TSC-22のアンチセンスオリゴによる発現抑制にて心筋細胞の肥大における機能を現在検討中である。

1.使用内部微阵列检查心脏肥大刺激引起的心内基因表达向培养的0至3日龄新生大鼠心肌细胞（通过Percoll法纯化）注射心脏肥大因子内皮素-1（以下简称ET） -1:10^-7M)，并在刺激后0、2、6、12和24小时提取总RNA。还提取了同一时间段内未刺激的心肌细胞的总 RNA，并使用内部心脏特异性微阵列检查了表达基因的差异。该阵列的特征是：1.它是从心脏cDNA文库创建的器官特异性阵列，以及2.通过使用减法去除冗余，它还包括心肌中表达水平相对较低的基因。通过分析基因表达随时间变化的差异，发现了值得注意的基因。据报道，一种名为 TSC-22 的基因对特定癌细胞具有生长抑制作用，但其在正常细胞（包括心肌细胞）中的生理作用和体内功能尚不清楚。微阵列分析的结果，我们观察到ET-1刺激使TSC-22表达增加，因此我们关注该基因并检查其他心脏肥大因子的表达。我们发现所有心脏肥大因子如去氧肾上腺素和CT -1 观察到表达增加。为了检查体内的表达，我们检查了野百合碱诱导的右心肥大模型的心肌，发现TSC-22的表达显着增加。为了分析 TSC-22 在心脏肥大中的功能，我们创建了 TSC-22 腺病毒并感染培养的心肌细胞。与对照组相比，未观察到心肌细胞形态的变化，也未观察到肥厚抑制或增强作用。我们目前正在通过反义寡核苷酸抑制 TSC-22 的表达来研究 TSC-22 在心肌细胞肥大中的功能。