アストログリアにおけるexcitotoxicityの研究

星形胶质细胞兴奋性毒性的研究

基本信息

批准号：
14770300
负责人：
斉木臣二
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kanazawa Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

O-2A progenitor cellsより株化したCG-4 cellsよりoligodendrocyte-like cells(OLC)およびtype 2 astrocyte-like cells(2ALC)を作成し、この2種類の細胞を用いた研究によって、以下の結果を得た。1)免疫組織化学的検討による同定:2ALCの約50%はglial fibrillary acidic protein(GFAP)陽性、90%はA2B5陽性で、これらの細胞はtype 2 astrocyteの表現型を示していることが示された。2)excitotoxicityの比較:2 mM kainateの投与24時間後の細胞障害過程を培養液中に放出されたlactate dehydrogenase(LDH)活性によって評価した。OLCの場合、LDH放出量の有意の上昇があり、AMPA型レセプターのdesensitizationを抑制するcyclothiazide投与によって、細胞障害は増強された。一方、2ALCの場合、2 mM kainate単独投与では細胞障害は見出されなかったが、100μM cyclothiazideの存在下では、軽度の細胞障害が見出された。3)Ca^<2+>流入に関する検討:インキュベーション液中に^<45>Ca^<2+>を含む溶液中で室温で10分間2mM kainate投与後の細胞内Ca^<2+>取り込みを検討した。その結果、2ALCによるCa^<2+>流入は、OLCに比べ27.5%であった。4)RT-PCRによるnon-NMDA型グルタミン酸レセプター遺伝子発現の検討:OLCおよび2ALCともにGluR2,GluR3,GluR4,GluR6,GluR7,KA1,KA2の遺伝子発現が認められた。5)定量化western blottingによるAMPA型レセプターの検討:2ALCではOLCに比べて、より多くのimmunodetectable GluR2が認められ、逆にimmunodetectable GluR3とGluR4に関しては少なかった。以上より、2ALCがOLCに比べAMPA型レセプターを介するexcitotoxicityに関してより抵抗性であることが示された。2ALCはOLCに比べ、よりCa^<2+>透過性の低いGluR2を多く発現していることがその一因と考えられた。

少突胶质细胞样细胞（OLC）和2型星形胶质细胞样细胞（2ALC）是从O-2A祖细胞建立的CG-4细胞中创建的，通过使用这两种类型的细胞进行研究获得了以下结果。知道了。 1）免疫组织化学检查鉴定：约50%的2ALC呈胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性，90%呈A2B5阳性，表明这些细胞表现出2型星形胶质细胞表型。 2)兴奋毒性的比较：通过释放到培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)的活性来评估给予2mM红藻氨酸后24小时的细胞毒性过程。在 OLC 中，LDH 释放显着增加，并且环噻嗪给药可抑制 AMPA 型受体脱敏，从而增强细胞损伤。另一方面，在2ALC的情况下，单独施用2mM红藻氨酸时没有发现细胞损伤，但在100μM环噻嗪存在时发现了轻微的细胞损伤。 3)Ca ^ 2+ 流入的研究：在含有^ 45 Ca ^ 2+ 的孵育溶液中在室温下给予2mM红藻氨酸10分钟后细胞内Ca ^ 2+ 摄取。我考虑过。结果，与OLC相比，2ALC的Ca 2+ 流入为27.5％。 4)通过RT-PCR检查非NMDA型谷氨酸受体基因表达：在OLC和2ALC中均观察到GluR2、GluR3、GluR4、GluR6、GluR7、KA1和KA2的基因表达。 5)通过定量蛋白质印迹检查AMPA型受体：2ALC显示比OLC更多的免疫可检测GluR2，相反免疫可检测的GluR3和GluR4更少。由上可知，2ALC比OLC更能抵抗AMPA型受体介导的兴奋性毒性。一个原因可能是2ALC比OLC表达更多的GluR2，其具有较低的Ca 2+ 渗透性。