ウエルシュ菌α毒素によるヒツジ赤血球の溶血に関連するスフィンゴリン脂質代謝の解析

产气荚膜梭菌α毒素溶血绵羊红细胞相关的鞘磷脂代谢分析

• 批准号: 14770124
• 负责人: 越智 定幸
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770124/
• 关键词: ウエルシュ菌; スフィンゴミエリン代謝; スフンゴシンキナーゼ; スフィンゴシンキナーゼ

1.α毒素処理したヒツジ奉血球から脂質を抽出し、この脂質画分からシリカゲル60カラムを用いて単純脂質を除去した後、得られた脂質画分について、高速液体クロマトグラフィーにてスフィンゴミエリン(SM)を分画した。このSM画分を高分解能FAB-MS分析し、SM分子種を同定した結果、ヒツジ赤血球中にはC_<24:1>、及び、C_<16:0>の炭素鎖を有する2種のSM分子種の存在が明らかになった。そこで、C_<24:1>或いは、C_<16:0>セラミド処理赤血球に対するα毒素の影響を検討したところ、本毒素による溶血にC_<16:0>セラミドはほとんど添加効果が認められなかったが、C_<24:1>セラミドの場合、セラミド濃度に依存して毒素による溶血の亢進が認められた。これらの結果から、α毒素によるSM代謝系を介したヒツジ赤血球のhot-cold型溶血にはC_<24:1>の炭素鎖を有するSM、及び、セラミド代謝が深く関与すると推察された。2.α毒素によるヒツジ赤血球ライセートのスフィンゴシン1-リン酸生成において、ボツリヌスC3酵素処理の影響を検討したところ、C3酵素の処理濃度に依存して本毒素によるスフィンゴシン1-リン酸生成が阻害されることが判明した。また、毒素によるセラミド生成に対するC3酵素の影響を検討すると、C3酵素の処理濃度に依存してセラミドの蓄積が認められた。これらC3酵素の効果は、熱処理不活化酵素を用いた場合には全く認められなかった。これらの結果から、α毒素によるヒツジ赤血球スフィンゴシンキナーゼの活性化は、低分子量Gタンパク質、rhoが関与することが明らかになった。

从α-毒素处理的绵羊血细胞中提取脂质，并使用硅胶60色谱柱从脂质馏分中除去简单的脂质，然后通过高性液体色谱法将鞘磷脂（SM）分馏以使其产生的脂质分数。通过高分辨率FAB-MS分析了该SM级分，以鉴定SM分子物质，并且存在两个具有C_ <24：1>和C_ <16：0>碳链的SM分子物种在绵羊红细胞中揭示。因此，当我们研究α-毒素对C_ <24：1>或C_ <16：0>神经酰胺处理的红细胞的影响时，C_ <16：0>神经酰胺对这种毒素引起的溶血的影响很小，但对于C_ <24：1> ceramide，由毒素引起的溶血症会增加毒素依赖于CERAMIDESINEMATION CERAMIDES浓缩。这些结果表明，通过α-毒素引起的SM代谢系统对绵羊红细胞的热冷溶血是对C_ <24：1>碳链和神经酰胺代谢的SM的溶血。 2。当我们研究肉毒杆菌C3酶处理对用α毒素中的绵羊红细胞裂解物在绵羊红细胞裂解物中产生的作用时，发现这种毒素受到C3 Enzyme处理浓度的抑制，该毒素被这种毒素的产生抑制。此外，在检查C3酶对毒素神经酰胺产生的影响时，根据C3酶的处理浓度观察到神经酰胺的积累。当使用热处理灭活酶时，根本没有观察到这些C3酶的作用。这些结果表明，α-毒素通过α-毒素激活绵羊红细胞鞘氨醇激酶，涉及低分子量G蛋白Rho。

项目成果

Takao Tsuji et al.: "Induction of cellular immunity to varicella-zoster virus glycoproteins tested with pernasal coadministration of escherichia coli enterotoxin in mice"J. Med. Virol.. 69・3. 541-458 (2002)

Takao Tsuji 等：“通过经鼻给予小鼠大肠杆菌肠毒素来诱导对水痘带状疱疹病毒糖蛋白的细胞免疫”J. Med. 69・3 (2002)。

Takao Tsuji et al.: "Induction of cellular immunity to varicella-zoster virus glycoproteins tested with pernasal coadministration of Escherichia coli enterotoxin in mice"J.Med.Virol.. 63・9. 451-458 (2003)

Takao Tsuji 等：“通过经鼻给予小鼠大肠杆菌肠毒素来测试对水痘带状疱疹病毒糖蛋白的细胞免疫” J.Med.Virol.. 63・9 (2003)。

Keiko Sasaki et al.: "Live varicella vaccine polarizes the mucosal adjuvant action of cholera toxin or its B subunit on specific Th1-type helper T cells………"J.Med.Virol.. 70・2. 329-335 (2003)

Keiko Sasaki 等人：“活水痘疫苗使霍乱毒素或其 B 亚基对特定 Th1 型辅助 T 细胞的粘膜佐剂作用极化......”J.Med.Virol.. 70・2. ）

越智 定幸(分担執筆): "細菌毒素ハンドブック"櫻井 純, 本田 武司, 小熊 惠二. 587 (2002)

Sadayuki Ochi（撰稿人）：《细菌毒素手册》Jun Sakurai、Takeshi Honda、Keiji Oguma 587 (2002)。