コレラ毒素Bサブユニットの粘膜免疫アジュバント活性機構に関する研究

霍乱毒素B亚基黏膜免疫佐剂活性机制研究

基本信息

批准号：
14770122
负责人：
井坂雅徳
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770122/
关键词：
粘膜免疫 CTB アジュバントサイトカインワクチン IgE アレルギー

项目摘要

研究実績の概要は以下のとおり.研究課題のコレラ毒素Bサブユニット(rCTB)の粘膜免疫アジュバント活性機構に関する研究において、平成15年度は、免疫担当細胞の解析(抗原特異的T細胞増殖反応、抗体産生細胞等)、抗原刺激細胞のサイトカインアッセイを行った。マウスはBALB/cを使用し、rCTB:10μg(経鼻)でジウテリアトキソイドと共に4回免疫した。また、昨年の報告と同様に、アルミニウムアジュバント2.5μg(皮下)、コレラトキシン(CT,100ng,経鼻)も使用し、比較対照とした。単核球を免疫マウス脾臓から、比重遠心法で分離し、1×106cell/mlの条件で、rCTBを10μg/mlの濃度で培養し、各種サイトカイン産生の比較を行った。結果として、インターフェロンガンマ(IFN gamma)の産生が多く、IL4等は余り観察されなかった。IFNgammaの産生量の経日変化をみると、rCTB添加後2日目でピークに到達し、以降その産生は低下していった。この現象は、免疫アジュバントの種類に関係なく、全てで同様の結果を得た。各アジュバントで免疫した単核球を上記で決めたrCTB濃度で共に2日間培養し、細胞表面マーカーに対するモノクロナール抗体で染色後、FACScanによりセルソーティングし、アジュバントによる差の有無を検討した。測定細胞数を固定して観察した結果、rCTBの添加の有無で、CD4/CD8の細胞比が極端に変化したことが初めて示された。またCD11b抗体陽性細胞がrCTBの添加で有意に上昇していることが観察された。rCTBはホロトキシンのCTとは事なり、in vitorでIFN gammaを産生させ、炎症を抑える方向に向かわせていることが考えられる。

我们的研究结果的概述如下。在有关霍乱毒素B亚基（RCTB）粘膜免疫辅助活性机制的研究主题中，我们在2003年进行了分析，分析了免疫细胞（抗原特异性T细胞增殖反应，抗体产生细胞等）和抗原刺激细胞的细胞因子分析。使用RCTB的BALB/C使用双甲司毒素免疫四次：10μg（鼻内）。另外，与去年的报告一样，还使用了2.5μg铝辅助（皮下）和霍乱毒素（CT，100 ng，鼻内）来提供比较。通过特异性重力离心将单核细胞与免疫小鼠的脾分离，并在1×10 6细胞/mL的条件下以10μg/ml的浓度培养RCTB，并比较各种细胞因子的产生。结果，不会更频繁地产生干扰素伽马（IFN伽马），并且未观察到IL4等。从添加RCTB后的第二天，它的IFNGAMMA生产量的每日变化都达到了峰值，此后的产量下降了。在所有情况下，无论免疫佐剂的类型如何，这种现象都是相似的。在上面确定的RCTB浓度上培养了用每种辅助物进行免疫的单核细胞，用单克隆抗体染色了细胞表面标记，然后使用FACSCAN对细胞进行分类以确定佐剂之间是否存在差异。固定细胞的测量数量并首次观察，并且证明CD4/CD8的细胞比在存在或不存在RCTB的情况下极大地改变了。还观察到，随着RCTB的添加，CD11b抗体阳性细胞显着增加。 RCTB是一种HOROTOXIN CT，人们认为它在Vitor中产生IFNγ，导致它朝着抑制炎症的方向。