TRP channelの活性制御機構の解明

TRP通道激活控制机制的阐明

基本信息

批准号：
14770021
负责人：
久恒智博
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770021/
关键词：
TRPC channel Src family tyrosine kinase tyrosine phosphorylation single channel recording EGF receptor Tyrosine phosphorylation Src family kinase

项目摘要

TRPC channelは、様々なホルモンや成長因子などの受容体が刺激されると活性化するイオンチャンネルである。現在までにこの受容体には、TRPC1からTRPC7までのsubtypeが存在することが報告されている。現在までにTRPC channelの活性制御機構として報告されている主要なものとして、IP3受容体と相互作用し、IP3受容体の開口を直接感知することによる活性化、ジアシルグリセロール(DAG)の直接結合による活性化などの報告があるが、未だ不明な点も多い。申請者は、様々なイオンチャネルがリン酸化により活性制御されることに着目し、TRPC channelがリン酸化により制御されている可能性を探った。そして、Src family tyrosineの一つ、Fyn tyrosine kinaseによりTRPC6 channelがチロシンリン酸化されることを初めて明らかにした。また、FynとTRPC6 channelが、COS-7細胞、およびラット脳において相互作用することを明らかにした。その相互作用には、FynのSH2 domainとTRPC6 channelのN末端細胞質内領域が必要であった。また、COS-7細胞において、EGF受容体を活性化すると、TRPC6 channelのチロシンリン酸化が亢進することを明らかにし、このリン酸化にSrc family tyrosine kinaseの活性化が必須であることを明らかにした。さらに、Single channel recoeding法により、TRPC6 channelは、チロシンリン酸化によりそのチャネル活性が上昇することを明らかにした。よって、Fyn tyrosine kinaseによる、TRPC6 channelのチロシンリン酸化は、新規なTRPC6 channelの活性制御機構であることが分かった。

TRPC 通道是当各种激素和生长因子的受体受到刺激时被激活的离子通道。迄今为止，据报道该受体有TRPC1至TRPC7亚型。迄今为止报道的控制TRPC通道活性的主要机制包括通过与IP3受体相互作用并直接感测IP3受体的开放来激活，以及通过直接结合二酰基甘油(DAG)来激活。还有很多未知数。申请人着眼于多种离子通道的活性受磷酸化控制的事实，探讨了TRPC通道受磷酸化控制的可能性。我们还首次揭示了 TRPC6 通道被 Fyn 酪氨酸激酶（Src 家族酪氨酸之一）酪氨酸磷酸化。我们还揭示了 Fyn 和 TRPC6 通道在 COS-7 细胞和大鼠大脑中相互作用。该相互作用需要 Fyn 的 SH2 结构域和 TRPC6 通道的 N 端胞质内区域。我们还发现，当 COS-7 细胞中 EGF 受体被激活时，TRPC6 通道的酪氨酸磷酸化会增加，并且 Src 家族酪氨酸激酶的激活对于这种磷酸化至关重要。此外，使用单通道重新编码方法，我们发现酪氨酸磷酸化可以增加TRPC6通道的通道活性。因此，发现Fyn酪氨酸激酶对TRPC6通道的酪氨酸磷酸化是调节TRPC6通道活性的新机制。