大気汚染物質3―ニトロベンズアントロンが誘発する突然変異の解析

空气污染物3-硝基苯并蒽酮诱导突变分析

• 批准号: 14780428
• 负责人: 川西 優喜
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780428/
• 关键词: 3-ニトロベンズアントロン; 突然変異; TLS; DNA付加体; DNA polymerase; DNA複製

申請書「研究計画・方法」に記述に従い本年度はNBA付加体のTLSにかかわるDNA polymeraseを分子遺伝学的方法を用いて解析した。ただ大腸菌JM103(uvrA,mutS)におけるDNA polymerase Pol II,Pol IV,Pol V欠損株が得られなかったため、JM103にかえてMGZ(uvrA)を用いてファージ(P1)トランスダクション法によりPol II,Pol IV,Pol V遺伝子欠損株を作成した。作成した各種polymerase欠損大腸菌MGZ株に、NBA付加体を部位特異的に1箇所だけ持つプラスミドを導入、複製させた。複製したプラスミドは、付加体箇所でTLSがおこるとLacZ遺伝子の読み枠が正しく青、付加体の反対側のDNA鎖が複製されると読み枠がずれて白いコロニーを生ずるよう設計されている。この表現形の違いを利用して複製プラスミドを解析した結果、pol V欠損株においてのみTLS頻度の上昇が認められなかった。またpol Vを過剰発現するプラスミドを導入したMGZ株でプラスミドを複製させるとT LS率が大幅に上昇した。これらのことからNBA付加体はpol V(umuD'_2C)によって損傷乗越え複製されることが分かった。更にこの複製プラスミドを抽出しその塩基配列を決定したところ、付加体箇所での突然変異率が4%以下と低く、複製が正確に行われ誤った塩基の取り込みはほとんどないことも判明した。

今年，我们使用分子遗传学方法分析了 NBA 加合物 TLS 中涉及的 DNA 聚合酶，如申请表“研究计划和方法”中所述。然而，由于我们无法获得 DNA 聚合酶 Pol II、Pol IV 和 Pol V 缺陷型大肠杆菌 JM103 (uvrA、mutS) 菌株，因此我们使用 MGZ (uvrA) 代替 JM103，并使用噬菌体 (P1) 转导方法产生 Pol II、Pol II 和 Pol V。创建了缺乏 IV 和 Pol V 基因的菌株。仅在一个位点含有 NBA 加合物的质粒被引入并复制到各种聚合酶缺陷型大肠杆菌 MGZ 菌株中。复制质粒的设计使得当加合物位点发生 TLS 时，LacZ 基因的阅读框正确且呈蓝色，而当复制加合物另一侧的 DNA 链时，阅读框发生偏移并呈白色产生菌落。使用这种表型差异分析复制质粒的结果是，仅在 pol V 缺陷菌株中没有观察到 TLS 频率的增加。此外，当在导入了过表达pol V的质粒的MGZ菌株中复制该质粒时，TLS率显着增加。这些结果表明 NBA 加合物可以通过 pol V(umuD'_2C) 过度损伤来复制。此外，当提取该复制质粒并测定其碱基序列时，发现加合物位点的突变率低至4％以下，并且复制精确地进行，几乎没有错误的碱基掺入。

项目成果

Masanobu Kawanishi, Michiyo Sakamoto, Akihide Ito, Kyoko Kishi, Takashi Yagi: "Construction of reporter yeasts for mouse aryl hydrocarbon receptor ligand activity."Mutation Research. 9;540(1). 99-105 (2003)

Masanobu Kawanishi、Michiyo Sakamoto、Akihide Ito、Kyoko Kishi、Takashi Yagi：“构建用于小鼠芳烃受体配体活性的报告酵母。”突变研究。

K.Savela, L.Kuusimaki, T.Kanno, M.Kawanishi, E.Weyand, S.Pohjola: "Vehicle-derived diesel particulate exhaust and analysis of DNA adducts formed by polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in vitro and occupationally exposed workers."Polycyclic Aromatic Com

K.Savela、L.Kuusimaki、T.Kanno、M.Kawanishi、E.Weyand、S.Pohjola：“车辆衍生的柴油颗粒废气以及多环芳烃 (PAH) 体外和职业接触工人形成的 DNA 加合物分析

Yukari Totsuka, Masanobu Kawanishi, Rena Nishigaki, Kazuki Matsukawa, Takashi Yagi, Takeji Takamura-Enya, Masahiko Watanabe, Takashi Suglmura, Keiji Wakabayashi: "Analysis of HPRT and supF mutations caused by pierisin-1, a guanine-specific ADP-ribosylatin

Yukari Totsuka、Masanobu Kawanishi、Rena Nishigaki、Kazuki Matsukawa、Takashi Yagi、Takeji Takamura-Enya、Masahiko Watanabe、Takashi Suglmura、Keiji Wakabayashi：“Pierisin-1（一种鸟嘌呤特异性 ADP-核糖苷酸）引起的 HPRT 和 suF 突变分析

八木孝司, 坂本三千代, 川西優喜: "酵母を用いた哺乳動物の多環芳香族炭化水素応答系の構築"環境変異原研究. 25. 61-67 (2003)

Takashi Yagi、Michiyo Sakamoto、Yuki Kawanishi：“利用酵母构建哺乳动物多环芳烃响应系统”环境诱变研究25. 61-67 (2003)。