大気汚染物質3―ニトロベンズアントロンが誘発する突然変異の解析

空气污染物3-硝基苯并蒽酮诱导突变分析

• 批准号: 14780428
• 负责人: 川西 優喜
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780428/
• 关键词: 3-ニトロベンズアントロン; 突然変異; TLS; DNA付加体; DNA polymerase; DNA複製

申請書「研究計画・方法」に記述に従い本年度はNBA付加体のTLSにかかわるDNA polymeraseを分子遺伝学的方法を用いて解析した。ただ大腸菌JM103(uvrA,mutS)におけるDNA polymerase Pol II,Pol IV,Pol V欠損株が得られなかったため、JM103にかえてMGZ(uvrA)を用いてファージ(P1)トランスダクション法によりPol II,Pol IV,Pol V遺伝子欠損株を作成した。作成した各種polymerase欠損大腸菌MGZ株に、NBA付加体を部位特異的に1箇所だけ持つプラスミドを導入、複製させた。複製したプラスミドは、付加体箇所でTLSがおこるとLacZ遺伝子の読み枠が正しく青、付加体の反対側のDNA鎖が複製されると読み枠がずれて白いコロニーを生ずるよう設計されている。この表現形の違いを利用して複製プラスミドを解析した結果、pol V欠損株においてのみTLS頻度の上昇が認められなかった。またpol Vを過剰発現するプラスミドを導入したMGZ株でプラスミドを複製させるとT LS率が大幅に上昇した。これらのことからNBA付加体はpol V(umuD'_2C)によって損傷乗越え複製されることが分かった。更にこの複製プラスミドを抽出しその塩基配列を決定したところ、付加体箇所での突然変異率が4%以下と低く、複製が正確に行われ誤った塩基の取り込みはほとんどないことも判明した。

根据今年的应用“研究设计和方法”的描述，使用分子遗传学方法分析了与NBA加合物中与TLS相关的DNA聚合酶。但是，由于未获得大肠杆菌JM103（UVRA，MUTS）中DNA聚合酶POL II，POL IV和POL V缺乏菌株，因此使用MGZ（UVRA）而不是JM103产生了Pol II，Pol IV和Pol V基因不足菌株。将仅具有一个位点特异性NBA加合物的质粒引入了已产生和复制的各种多聚合酶大肠杆菌MGZ菌株中。设计了复制的质粒，以便当TLS发生在加合物位置时，LACZ基因的阅读框是正确的蓝色，并且当复制加合物的另一侧的DNA链时，阅读框架会移动并产生白色菌落。使用表型的这种差异，我们分析了复制的质粒，发现仅在Pol V v型菌株中没有观察到TLS频率的增加。此外，用质粒引入的MGZ菌株复制质粒，过表达POL V显着提高了T LS速率。这些发现表明NBA加合物由Pol V（Umud'_2C）复制。此外，当提取复制质粒并确定其基本序列时，发现加合物位置的突变速率在4％或更低时较低，并且准确执行了复制，并且很少进行碱基吸收。

项目成果

Masanobu Kawanishi, Michiyo Sakamoto, Akihide Ito, Kyoko Kishi, Takashi Yagi: "Construction of reporter yeasts for mouse aryl hydrocarbon receptor ligand activity."Mutation Research. 9;540(1). 99-105 (2003)

Masanobu Kawanishi、Michiyo Sakamoto、Akihide Ito、Kyoko Kishi、Takashi Yagi：“构建用于小鼠芳烃受体配体活性的报告酵母。”突变研究。

K.Savela, L.Kuusimaki, T.Kanno, M.Kawanishi, E.Weyand, S.Pohjola: "Vehicle-derived diesel particulate exhaust and analysis of DNA adducts formed by polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in vitro and occupationally exposed workers."Polycyclic Aromatic Com

K.Savela、L.Kuusimaki、T.Kanno、M.Kawanishi、E.Weyand、S.Pohjola：“车辆衍生的柴油颗粒废气以及多环芳烃 (PAH) 体外和职业接触工人形成的 DNA 加合物分析

Yukari Totsuka, Masanobu Kawanishi, Rena Nishigaki, Kazuki Matsukawa, Takashi Yagi, Takeji Takamura-Enya, Masahiko Watanabe, Takashi Suglmura, Keiji Wakabayashi: "Analysis of HPRT and supF mutations caused by pierisin-1, a guanine-specific ADP-ribosylatin

Yukari Totsuka、Masanobu Kawanishi、Rena Nishigaki、Kazuki Matsukawa、Takashi Yagi、Takeji Takamura-Enya、Masahiko Watanabe、Takashi Suglmura、Keiji Wakabayashi：“Pierisin-1（一种鸟嘌呤特异性 ADP-核糖苷酸）引起的 HPRT 和 suF 突变分析

八木孝司, 坂本三千代, 川西優喜: "酵母を用いた哺乳動物の多環芳香族炭化水素応答系の構築"環境変異原研究. 25. 61-67 (2003)

Takashi Yagi、Michiyo Sakamoto、Yuki Kawanishi：“利用酵母构建哺乳动物多环芳烃响应系统”环境诱变研究25. 61-67 (2003)。