ヒト血管内皮細胞において局所麻酔薬が一酸化窒素産生に与える影響

局麻药对人血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

• 批准号: 14771142
• 负责人: 高石 和美
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771142/
• 关键词: 一酸化窒素; 局所麻酔薬; ヒト大動脈内皮細胞; 血管内皮細胞

培養ヒト大動脈内皮細胞(HAEC)をアセチルコリンおよびIL-1βで刺激し、一酸化窒素合成酵素(NOS)活性に対する局所麻酔薬の影響を検索した。HAECにおいてアセチルコリンは内皮型NOS(eNOS)を活性化し、IL-1βは誘導型NOS(iNOS)を活性化した。NO産生量の比較にはNO測定キットを使用し、2.3-Diaminonaphthaleneを用いてNOの代謝産物であるnitrateおよびnitriteの量を測定した。その結果、局所麻酔薬のプロカインはHAECにおいてeNOSあるいはiNOS活性を抑制した(p<0.01)。リドカインはeNOSあるいはiNOS活性に対して影響を及ぼさなかった。また、eNOSは細胞膜のカベオレに存在するが、活性型は細胞質に遊離する。そのため細胞膜蛋白および細胞質蛋白を抽出しウェスタンブロット法によりeNOS蛋白の局在に対する局所麻酔薬の影響を検索した。その結果、eNOS蛋白の細胞質への遊離を局所麻酔薬は抑制する傾向を示したため現在更なる検索を続行している。さらに、カベオレ内のeNOSはカベオリンを介してアルギニントランスポーター1と結合している。アルギニンはNOSの基質であり細胞外からのアルギニン供給はNOS活性に影響を及ぼすとされている。そのため高速液体クロマトグラフィーによってアルギニン輸送量を測定し、局所麻酔薬が血管内皮細胞へのアルギニン輸送に与える影響について検索した。その結果、局所麻酔薬はアルギニン輸送を抑制する可能性が示唆された。

用乙酰胆碱和 IL-1β 刺激培养的人主动脉内皮细胞 (HAEC)，并研究局部麻醉剂对一氧化氮合酶 (NOS) 活性的影响。 HAEC 中乙酰胆碱激活内皮型 NOS (eNOS) 和 IL-1β 激活诱导型 NOS (iNOS)。使用NO测定试剂盒比较NO的产生量，并使用2.3-二氨基萘测定作为NO的代谢物的硝酸盐和亚硝酸盐的量。结果，局麻药普鲁卡因抑制了 HAEC 中的 eNOS 或 iNOS 活性 (p<0.01)。利多卡因对 eNOS 或 iNOS 活性没有影响。此外，虽然eNOS存在于细胞膜的小窝中，但其活性形式被释放到细胞质中。因此，我们提取细胞膜蛋白和细胞质蛋白，并利用Western blotting检测局麻药对eNOS蛋白定位的影响。结果表明，局麻药倾向于抑制eNOS蛋白释放到细胞质中，因此目前正在进行进一步的研究。此外，小窝中的 eNOS 通过小窝蛋白与精氨酸转运蛋白 1 连接。精氨酸是 NOS 的底物，据说细胞外的精氨酸供应会影响 NOS 活性。因此，我们通过高效液相色谱法测量了精氨酸的转运量，并研究了局麻药对精氨酸转运至血管内皮细胞的影响。结果表明，局部麻醉剂可能会抑制精氨酸转运。