産生効率が高く、物理的に安定で、生物学的半減期の短い黄体刺激ホルモン誘導体の開発

开发生产效率高、物理稳定性好、生物半衰期短的黄体生成素衍生物

• 批准号: 14770848
• 负责人: 佐藤 朝臣
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770848/
• 关键词: 黄体刺激ホルモン(LH); 遺伝子組み換え; CHO

1.LHは、生理的な排卵誘発剤であるが,広く臨床応用されているhCGと比較し,その産生効率は低く,高価であるため一般に使用される状況にない。recombinant LHの分泌効率が不良である原因として,LHβサブユニットのC末端における7個の疎水性のアミノ酸配列の存在が示唆されている。site-directed mutagenesisによりLHβ-C末端のアミノ酸残基を121から119,117,114位まて順次欠失させた変異体を作製し,CHO細胞において発現させた。各細胞を、^<35>S-システインにて標識し,免疫沈降反応にてLHβサブユニットの分泌動態を検討した。その結果,アミノ酸が2個欠失したLHβ119は,LHβと比較し,分泌効率が改善されることが示された。LHβ117,LHβ114についてもLHβと比較し,分泌効率が改善されることが示された。2.LHβと高いhomologyを有するhCGβでは,アミノ酸残基26-110間のS-S結合形成過程がタイマー形成,分泌の律速段階であることが報告されている。LHβの26,110位のシステインをsite-directed mutagenesisによりアラニンに置換し,両者間のS-S結合を欠失させ,その分泌動態に及ぼす影響について検討した。その結果,LHβ26-110はLHβと比較し,分泌半減期が短縮し,単位時間当たりの分泌量が増加することが示された。3.LHのα,β二つのサブユニットをコードする遺伝子をoverlap PCR法により結合させ,単一の遺伝子としたsingle chain LHをCHO細胞において発現させると,LHタイマーと比較しその分泌効率が向上する。LHβ26-110変異を、single chain LHにおいて導人すると,さらにsingle chain LHの分泌効率に改善することか示された。

1。LH是一种生理排卵诱导剂，但与已广泛应用的HCG相比，其生产效率低且昂贵，因此不常用。建议重组LH的分泌效率较差，该分泌效率在LHβ亚基的C末端存在七个疏水氨基酸序列。产生了一个突变体，其中从121至119、117和114的位置将LHβ-C末端处的氨基酸残基被删除，并在CHO细胞中表达。每个细胞用 ^<35> s-结晶石标记，并在免疫沉淀反应中检查了LHβ亚基的分泌动力学。结果表明，与LHβ相比，具有两个氨基酸的LHβ119提高了分泌效率。还表明，与LHβ相比，LHβ117和LHβ114的分泌效率提高了。 2。在与LHβ具有高同源性的HCGβ中，据报道，氨基酸残基26-110之间的S-S键形成过程是计时器形成和分泌的速率限制步骤。 LHβ位置26,110处的半胱氨酸被位置定向的诱变取代，并删除了它们之间的S-S键，并研究了对其分泌动力学的影响。结果表明，与LHβ相比，LHβ26-110的分泌半衰期缩短了，每单位时间的分泌增加。 3。当编码LH两个亚基的基因被重叠PCR组合，单链LH在CHO细胞中表达时，与LH计时器相比，分泌效率提高了。已经表明，在单链LH中得出LHβ26-110突变进一步提高了单链LH的分泌效率。