発生工学的手法を用いた蛋白尿発症の分子機構解明と新しい腎炎・腎症治療法の開発

利用发育工程方法阐明蛋白尿发病的分子机制并开发新的肾炎/肾病治疗方法

• 批准号: 14770567
• 负责人: 菅波 孝祥
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Research Institute for Production Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770567/
• 关键词: 糸球体上皮細胞; 蛋白尿; CTGF; Cyr61; プロスタグランジンE; EP1; MAPキナーゼ; 糸球体上皮細胞; 蛋白尿; CTGF; Cyr61; プロスタグランジンE; EP1; MAPキナーゼ

蛋白尿発症のメカニズムの解明を目的として、糸球体上皮細胞(podocyte)を標的に研究を行い、以下の研究成果を得た。1.培養podocyteの細胞骨格構築、細胞外基質産生に関する細胞内シグナルの解析糖尿病性腎症や慢性腎炎などの蛋白尿出現時には、podocyteの形態変化(足突起の癒合)や細胞外基質の過剰産生(糸球体基底膜の肥厚)が認められる。今回我々は、transforming growth factor-β刺激による細胞外基質産生にconnective tissue growth factor(CTGF)の誘導やMAPキナーゼ系(ERK, p38 MAPK)の活性化が重要であることを培養podocyteを用いて明らかにした。また、酸化ストレスによるactin再構成においても、MAPキナーゼ系(ERK, JNK, P38 MAPK)が関与することを見出した。現在、podocyte傷害ネフローゼ症侯群モデル(アドリアマイシン腎症)において、MAPキナーゼ阻害薬が蛋白尿に及ぼす効果を検討中である。2.podocyte特異的cystein-rich protein 61(Cyr61), CTGF過剰発現マウスの作製と解析podocyteの傷害が蛋白尿の発症や糸球体硬化につながる一方で、糸球体再生モデル(Thy-1腎炎)では、podocyteが糸球体の再生・修復に重要な働きを果たすことが想定されている。そこで、podocyte特異的(subtraction法)で、かつ糸球体再生時に発現亢進(reverse Northern blot法)する遺伝子のスクリーニングを行った。このうち、胎生期の血管形成に不可欠な因子であるCyr61に注目して、メサンギウム細胞の遊走、接着抑制作用をin vitroで明らかにした。さらに、nephrin遺伝子プロモーターの下流にマウスCyr61 cDNAを連結して、podocyte特異的にCyr61を過剰発現するトランスジェニックマウスを作製した。また、同様にCTGF過剰発現マウスも作製した。現在、両者ともfounderが誕生し、lineの確立を行っている。3.糖尿病性腎症モデルにおけるプロスタグランジンE受容体EP1特異的阻害薬(EP1A)の効果の検討1型糖尿病性腎症モデル(ストレプトゾトシン誘発糖尿病)ラットおよびマウスにおいて、EP1Aの投与は、血糖値や血圧に明らかな影響を及ぼすことなく、著明な蛋白尿減少効果を示し、種を超えた有効性が明らかとなった。

为了阐明蛋白尿发育的机制，我们进行了靶向肾小球上皮细胞（足细胞）的研究，并获得了以下研究结果：1。培养的足细胞的细胞骨架构造以及细胞内信号涉及蛋白尿时会产生诸如糖尿病症状的肾上腺酸性或依恋型肾上腺素的细胞外基质的细胞内信号的分析。 （脚步的联合）观察到过度产生细胞外基质（肾小球基底膜增厚）。在本文中，我们使用培养的足细胞证明了结缔组织生长因子（CTGF）和MAP激酶系统（ERK，p38 MAPK）的激活对于通过刺激转化生长因子-β的刺激而产生的细胞外基质。此外，发现MAP激酶系统（ERK，JNK，P38 MAPK）参与由氧化应激引起的肌动蛋白重构。目前，正在研究正在研究MAP激酶抑制剂对蛋白尿蛋白尿对足细胞损伤肾病综合征模型（Adrimycin肾病）的影响。 2. Podocyte-specific cystein-rich protein 61 (Cyr61), preparation and analysis of CTGF-overexpressing mice While podocyte injury leads to the development of proteinuria and glomerulus sclerosis, in the glomerular regeneration model (Thy-1 nephritis), it is assumed that podocyte plays an important role in glomerular regeneration and repair.因此，我们筛选了肾小球再生期间反向北印迹方法的足细胞特异性（减法方法）的基因。其中，我们专注于CYR61，这是胎儿阶段血管生成的重要因素，并揭示了肾小球细胞迁移和粘附抑制的体外作用。此外，将小鼠CYR61 cDNA与肾蛋白基因启动子的下游结扎在一起，以产生特有在Podocyte中过表达Cyr61的转基因小鼠。同样，还产生了CTGF过表达的小鼠。目前，都有创始人并且正在建立线路。 3。检查前列腺素E受体EP1特异性抑制剂（EP1A）在大鼠和小鼠中的糖尿病性肾病模型中的影响，EP1A的给药显示出明显的蛋白尿减少作用，没有对血糖或血压的任何明显影响，并且在物种中的有效性均显示出任何明显的影响。