アルコール・薬物依存の神経細胞障害と防御機構におけるカルシウムとアネキシンの役割

钙和膜联蛋白在酒精/药物依赖引起的神经元损伤和防御机制中的作用

基本信息

批准号：
13770555
负责人：
橋本恵理
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

アルコール・薬物依存におけるCa^<2+>・リン脂質結合蛋白質アネキシンの役割に関して、分子生物学的手法を用いて、特に薬物暴露による細胞障害性の観点から検索することを目的とした。アネキシンIVの発現量がエタノール暴露した培養細胞において増大することは既に明らかにしたが、MTT法で細胞障害が認められない濃度のエタノール(50mM)暴露時にもアネキシンIV発現量は対照群に比べて増大し、エタノールの直接の影響でアネキシンIVが発現変化を起こすことが示唆された。次に、アネキシンIV-DNAをトランスフェクトして強制発現を行った細胞を用いて、アネキシンIVの発現変化とエタノールによる細胞障害との関連を検討した。C6細胞ではアネキシンIVの強制発現でエタノールによる細胞障害性の増大が認められた。海馬の初代神経細胞でも同様にアネキシンIVの強制発現を行い、アネキシンIVの発現増大によりエタノールによる細胞障害活性が上昇することが示された。一方、エタノール非添加時にはアネキシンIVの強制発現による細胞障害性は認められなかった。したがって、アネキシンIVはエタノール暴露下においてエタノールによる細胞障害性を増強する働きをもつことが示唆された。既にヒト死後脳において、アルコール依存症群の海馬領域でのアネキシンIVの有意な増加を認めているが、本研究での培養細胞におけるエタノール暴露下のアネキシンIV発現量増大との結果と矛盾しない所見と考えられる。また、今回培養細胞で得られた知見をヒト-アルコール依存症の病態理解へと還元する試みとして、ヒト血清中でのアネキシン自己抗体を測定した。アルコール依存症者の末梢血において、健常者に比べてより高い抗体価の抗アネキシンIV自己抗体の存在が明らかになり、アネキシンIVがアルコール依存症の生物学的マーカーとなる可能性が示唆された。

目的是寻找酒精和药物依赖性在磷脂结合蛋白焦虑作用中的作用，尤其是使用分子生物学方法从药物暴露引起的细胞疾病的角度来看。尽管已经很清楚的是，Anexin IV的表达量会在暴露于乙醇的培养细胞中增加，但MTT方法不识别细胞疾病。接下来，使用被迫表达Anexin IV-DNA的细胞检查了焦虑IV的表达变化与乙醇引起的细胞障碍之间的关系。在C6细胞中，由于乙醇的细胞疾病增加而识别出焦虑IV的强制表达。还表明，海马的第一代神经细胞被迫表达焦虑症，并且焦虑IV的表达增加了由于乙醇引起的细胞疾病活性。另一方面，当未添加乙醇时，由于强迫表达焦虑症IV，未观察到细胞障碍。因此，有人提出，焦虑IV具有在乙醇暴露下通过乙醇增强细胞疾病的功能。人类死亡后的大脑已经在大脑中，酒精添加组已经确认海马地区的Anexin IV显着增加，但与在乙醇IV表达在乙醇暴露下的量增加的结果并不矛盾。培养的细胞在这项研究中被认为。另外，作为试图将在培养细胞中获得的知识归还对人类酒精饮料的理解，测量了人类中的Anexin自身抗体。在依赖酒精的人的周围血液中，与健康的人相比，已经揭示了抗狂欢蛋白IV自动抗体的存在，这表明膜联蛋白IV将是酒精性依赖性的生物标记。