ウイルスに対する防御機構における二本鎖RNA特異的アデノシンデアミナーゼの役割

双链RNA特异性腺苷脱氨酶在病毒防御机制中的作用

• 批准号: 13760040
• 负责人: 中原 健二
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Akita Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760040/
• 关键词: ウイルス; RNAサイレンシング; 二本鎖RNA; アデノシンデアミンー; シロイヌナズナ

本研究は植物のウイルスに対する感染防御機構、RNAサイレンシングの分子機構の解明を目的とする。RNAサイレンシングは二本鎖RNAを形成した塩基配列を特異的に認識して分解することが分かっている。植物ウイルスの多くはRNAウイルスあり複製中間体として二本鎖RNAを形成するので理にかなった認識機構である。本認識機構に関わる宿主遺伝子の探索を目的として、二本鎖RNA特異的アデノシンデアミナーゼ(dsRAD)遺伝子のクローニングを試みた。この遺伝子は動物においてインターフェロン及びウイルス感染により発現が誘導されることが報告されているが、植物でまだ見つかっていない。そこで申請者はDNAデーターベース上で検索を行ったところ、dsRAD遺伝子をコードする可能性のある塩基配列をシロイヌナズナで見出し、部分的なcDNAを得た。さらに5'および3'RACE法により全長cDNAをクローニングして動物のdsRADと比較したところ、アデノシンデアミナーゼ活性部分はあるが、二本鎖RNAとの結合部分がないことが分かった。動物でも同様のアデノシンデアミナーゼが見つかっており、tRNAを修飾していることが報告されている。従って、本遺伝子はdsRADではなくtRNAに作用するアデノシンデアミナーゼでRNAサイレンシングにおける役割はないものと思われた。シロイヌナズナには他にdsRADの候補は見出せず、dsRADはRNAサイレンシングには関わっていないと思われた。これを支持する結果が、最近、動物のRNAサイレンシングであるRNAiに関する実験でZamoreらにより報告されている。そこで、植物ウイルスのRNAサイレンシング阻害遺伝子を用いてRNAサイレンシング阻害遺伝子を用いてRNAサイレンシングに関わる宿主遺伝子を探索することにした。本科学研究費補助金の継続を辞退し、渡米して本研究を鋭意進めているところである。

这项研究旨在阐明抗植物抵抗病毒和RNA沉默的分子机制的感染机制。已经发现，RNA沉默专门识别并降解形成双链RNA的核苷酸序列。许多植物病毒形成双链RNA作为RNA病毒相关的复制中间体，使其成为合理的识别机制。为了搜索与此识别机制有关的宿主基因，我们试图克隆双链RNA特异性腺苷脱氨酶（DSRAD）基因。据报道，该基因是通过干扰素和病毒感染在动物中诱导的，但在植物中尚未发现。然后，申请人在DNA数据库上进行了搜索，并找到了可能在拟南芥中编码DSRAD基因并获得部分cDNA的核苷酸序列。此外，将全长cDNA通过5'和3'种族方法克隆，并与动物dsrad进行比较，并发现尽管存在活性部分的腺苷脱氨酶，但没有具有双链RNA的结合部分。在动物中发现了类似的腺苷脱氨酶，据报道可以改变tRNA。因此，该基因是作用于tRNA而不是dsrad的腺苷脱氨酶，并且似乎在RNA沉默中没有作用。在拟南芥中没有发现其他DSRAD候选人，被认为没有参与RNA沉默。 Zamore等人最近报道了对此的支持。在RNAi的实验中，RNAi是动物中的RNA沉默。因此，我们决定使用植物病毒的RNA沉默抑制基因使用RNA沉默抑制基因搜索参与RNA沉默的宿主基因。他拒绝继续为科学研究提供赠款，目前正搬到美国进行大量进行这项研究。