Molecular mechanism of calmodulin-like proteins-mediated recognition and control of viral virulent factors

类钙调蛋白介导病毒毒力因子识别与控制的分子机制

基本信息

批准号：
19F19391
负责人：
中原健二
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-11-08 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

受け入れ研究者は、これまでカルモジュリン様タンパク質(CML)とCMV 2bを含むウイルスのRNAサイレンシング抑制タンパク質との相互作用について研究してきた。CMLと2bの相互作用の背景メカニズムを解明するために、昨年までのDr. Akhter特別研究員と受け入れ研究者の研究で、葉緑体外包膜タンパク質がCMLと2b両方と結合することを酵母ツーハイブリッド法により見出した。また、CMV 2bがオートファジーのキー遺伝子であるATG8と結合することを酵母ツーハイブリッド法による試験で見出した。本年度は、これらの結合、すなわち、CMV 2bとCML、CMLと葉緑体外包膜タンパク質、葉緑体外包膜タンパク質とCMV 2b、およびCML 2bとATG8が植物細胞内でも結合するのかどうか、それらのタンパク質とルシフェラーゼの部分断片を融合させた融合タンパク質を一過発現し、結合の有無をルシフェラーゼ活性で測定するsplit luciferase相補解析により検証した。植物細胞での一過発現には、Nicotiana benthamiana葉でのアグロバクテリウムのインフィルトレーションにより一過発現系を用いた。その結果、split luciferase相補解析により植物細胞内においていずれの組み合わせでも結合していることが確かめられた。そこで、これらの結合が、それぞれのタンパク質の機能や役割にどのように関わるのか、検証を進め、葉緑体外包膜タンパク質の高発現下で、CMV 2bの蓄積量が低下して、RNAサイレンシング抑制活性が弱まることが分かった。CMV 2bは葉緑体外包膜タンパク質と結合するとATG8との結合を介したオートファジーによる分解が促進している可能性が考えられた。受け入れ研究者の以前の研究でCMLは2bと結合しオートファジーによる分解に導くことでウイルス防御に関わることを明らかにした。そしてDr. Akhter特別研究員との本研究により、このCMLを介したウイルス防御機構に葉緑体外包膜タンパク質が重要な貢献をしていることが示唆された。

接受研究人员以前已经研究了钙调蛋白样蛋白（CML）和病毒RNA沉默抑制蛋白（包括CMV 2B）之间的相互作用。为了阐明CML和2B之间相互作用的背景机制，在Akhter博士的一项研究中，直到去年接受研究人员的研究，我们发现使用酵母两种杂交方法的绿色脂超植物包裹的膜蛋白都结合了CML和2B。此外，CMV 2B与ATG8结合，即自噬的关键基因，在酵母两杂化测试中是CMV 2B与ATG8的结合。今年，我们验证了这些结合，即CMV 2B和CML，CML和氯塑料包膜外膜蛋白，叶绿体包裹的膜蛋白和CMV 2B，以及CML 2B和ATG8，以及在植物细胞中，在植物细胞中，这些蛋白质以及这些融合的融合蛋白，以及这些蛋白质的融合蛋白。不是使用分裂荧光素酶互补分析进行结合，该分析测量使用荧光素酶活性的结合存在或不存在。为了在植物细胞中过度表达，在烟草本植物叶片中，使用了跨性别系统。结果，分裂荧光素酶互补分析证实，任何组合都在植物细胞中结合。因此，我们研究了这些结合如何与每种蛋白质的功能和作用相关，并发现在高表达应贝外质体膜蛋白的表达中，CMV 2B的积累降低，导致RNA沉默抑制性活性的减弱。人们认为，当CMV 2B与包裹膜蛋白的外氯脂外体结合时，它可能通过与ATG8结合来促进自噬降解。受け入れ研究者の以前の研究でCMLはcmlはははははは2Bと结合しオートファジーによる分解に导くことでウイルス防御に关わることを明らかにした。与Akhter博士这项研究表明，Akhter博士建议对这种CML介导的CML介导的病毒抗性抗辩抗氯丙烷蛋白的重要贡献。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Incidence and diagnosis of major watemelon diseases in Bangladesh

孟加拉国西瓜主要病害的发生及诊断

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Akhter;MDS.;Rhman;MS.;Jahan;K-E.;Rahman;MZ.;Faruk;MI.;Elahi;F-E.;Khatun;F
通讯作者：
F

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中原健二其他文献

Paired immunities that impose trade-offs on viruses secure durability of the immunities in plants

对病毒进行权衡的配对免疫确保了植物免疫的持久性

DOI：
10.14952/seikagaku.2017.890436
发表时间：
2017
期刊：
生化学
影响因子：
0
作者：
Zhila Osmani;Shinnosuke Jin;Masafumi Mikami;Masaki Endo;Hiroki Atarashi;Kaien Fujino;Tetsuya Yamada;Kenji S. Nakahara;中原健二
通讯作者：
中原健二