生体内におけるToll-like receptorの役割の解析

Toll样受体体内作用分析

• 批准号: 02J04856
• 负责人: 邊見 弘明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J04856/
• 关键词: Toll-like receptor; 繊維芽細胞; リポポリサッカライド; 二本鎖RNA; ウイルス; IFN-β; CpG DNA; Toll-like receptor 9; MyD88; 樹状細胞サブセット; IFN-α; IL-12

本年度は、TLR3やTLR4のシグナル伝達分子の一つとして報告されているI-κB kinase (IKK)関連分子であるIKK-iやTBK1それぞれの遺伝子欠損マウスの解析を行った。TBK1欠損マウスは致死であるため、胎仔より繊維芽細胞(EF)を調整し実験を行った。IKK-i欠損またはTBK1欠損細胞は、ともにTNF-αやIL-1β,TLR4リガンドであるリポポリサッカライド(LSP)やTLR2リガンドである細菌由来リポペプチドに反応して正常細胞と同程度のIL-6の産生を認めた。さらに、LPS刺激によるIFN-βやIFN誘導性遺伝子であるISG54やIP-10などの遺伝子発現を検討したところ、TBK1欠損細胞でのみこれら遺伝子の発現が減少していた。さらに、これらEFを二本鎖RNAのアナログであるpoly(I:C)で刺激したところ、IKK-i欠損細胞は正常細胞と同様な反応を示すが、TBK1欠損細胞でIFN-βやIFN誘導性遺伝子の発現誘導が障害されていた。さらに、IKK-i/TBK1両遺伝子欠損細胞は、poly(I:C)によるIFN-β誘導が完全に消失し、IKK-iもpoly(I:C)刺激において、IFN-βの産生誘導に関与していることが判明した。また、これらIFN-βやIFN誘導性遺伝子の発現に関与している転写因子IRF-3の活性化がTBK1欠損細胞では障害されていた。さらには、センダイウイルスなどによるこれらIFN-βやIFN誘導性遺伝子の誘導もTBK1欠損細胞で障害され、TBK1がTLR4やウイルス感染によるIFN-βやIFN誘導性遺伝子の発現誘導に重要な役割を担っていることが判明した。この研究成果は、現在投稿中である。このほか、TLRファミリー分のアダプター分子の機能解析や、TLR7やTLR8のリガンドの探索にも参画した。

今年，我们分析了 IKK-i 和 TBK1 基因缺陷的小鼠，这些基因是 I-κB 激酶 (IKK) 相关分子，据报道是 TLR3 和 TLR4 的信号转导分子之一。由于TBK1缺陷小鼠是致命的，我们从胚胎中制备成纤维细胞（EF）并进行实验。 IKK-i 缺陷或 TBK1 缺陷细胞对 TNF-α、IL-1β、脂多糖 (LSP)（TLR4 配体）和细菌脂肽（TLR2 配体）的反应程度与正常细胞相同。观察到 6 个。此外，当我们检查LPS刺激后IFN-β和IFN诱导基因ISG54和IP-10等基因的表达时，我们发现这些基因的表达仅在TBK1缺陷的细胞中降低。此外，当用双链RNA类似物poly(I:C)刺激这些EF时，IKK-i缺陷型细胞表现出与正常细胞相似的反应，但TBK1缺陷型细胞表现出IFN-β和IFN诱导。性基因表达受损。此外，在 IKK-i 和 TBK1 基因均缺陷的细胞中，poly(I:C) 诱导的 IFN-β 完全消失，并且 IKK-i 还可以在 Poly(I:C) 刺激下诱导 IFN-β 产生。得知他参与其中。此外，TBK1缺陷细胞中参与这些IFN-β和IFN诱导基因表达的转录因子IRF-3的激活受到损害。此外，在TBK1缺陷细胞中，仙台病毒等对这些IFN-β和IFN诱导基因的诱导也受到损害，这表明TBK1在诱导TLR4表达IFN-β和IFN诱导基因方面发挥着重要作用。和病毒感染。这项研究的结果目前正在提交。此外，他还参与了TLR家族接头分子的功能分析以及TLR7和TLR8配体的寻找。

项目成果

Hiroaki Hemmi et al.: "The Roles of Toll-Like Receptor 9, MyD88, and DNA-Dependent Protein Kinase Catalytic Subunit in the Effects of Two Distinct CpG DNAs on Dendritic Cell Subsets"The Journal of Immunology. 170. 3059-3064 (2003)

Hiroaki Hemmi 等人：“Toll 样受体 9、MyD88 和 DNA 依赖性蛋白激酶催化亚基在两种不同 CpG DNA 对树突状细胞亚群的影响中的作用”免疫学杂志。

Florian Heil et al.: "Species-Specific Recognition of Single-Stranded RNA via Toll-like Receptor 7 and 8"Science. 303. 1526-1529 (2004)

Florian Heil 等人：“通过 Toll 样受体 7 和 8 对单链 RNA 进行物种特异性识别”科学。

Sandra S.Diebold et al.: "Innate Antiviral Responses by Means of TLR7-Mediated Recognition of Single-Stranded RNA."Science. 303. 1529-1531 (2004)

Sandra S.Diebold 等人：“通过 TLR7 介导的单链 RNA 识别实现先天抗病毒反应”。《科学》。

Masahiro Yamamoto et al.: "Essential role for TIRAP in activation of the signalling cascade shared by TLR2 and TLR4"nature. 420. 324-329 (2002)

Masahiro Yamamoto 等人：“TIRAP 在 TLR2 和 TLR4 共享的信号级联激活中的重要作用”性质。

Masahiro Yamamoto et al.: "Role of adaptor TRIF in the MyD88-independent toll-like receptor signaling pathway."Science. 301. 640-643 (2003)

Masahiro Yamamoto 等人：“适配器 TRIF 在 MyD88 独立的 Toll 样受体信号通路中的作用。”科学。