細胞成長因子がヒト歯髄細胞の接着分子発現におよぼす影響

细胞生长因子对人牙髓细胞粘附分子表达的影响

基本信息

批准号：
13771149
负责人：
中田和彦
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Aichi Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト歯髄細胞(DP細胞)の接着分子Platelet endothelial cellular adhesion molecule-1(PECAM-1)発現におよぼす細胞成長因子EGFおよびbFGFの影響について、高感度なイムノブロット分析法を用いて検索した。臨床分離したDP細胞をコンフルエントに達するまで培養した後、代表的な細胞成長因子である上皮増殖因子(epidermal growth factor : EGF)および線維芽細胞増殖因子(basic fibroblast growth factor : bFGF)を所定の濃度範囲(0.8,4,20,100ng/mL)で48時間作用させた。所定時間が経過した後、界面活性剤(トリトンX-100など)を含む抽出用バッファーを用いて細胞膜画分を回収し、イムノブロット法のサンプルとした。各サンプルのタンパク濃度を測定後、タンパク量が10μg/レーンとなるようにしてSDS-PAGEを行った。ニトロセルロースメンブレンを用いて、タンパクのブロッティングを行った後、ブロッキンクを行った。ついで、抗ヒトPECAM-11次抗体およびHRP標識2次抗体をそれぞれ反応させて、ECLウエスタンブロッティング検出システムとX線フィルムを使用して発光シグナルを検出した。その結果、次のような知見を得た。(1)DP細胞は、無血清培地条件下において、無刺激の場合、PECAM-1をタンパクレベルで発現していなかった。(2)DP細胞のPECAM-1タンパクの発現は、EGFおよびbFGF添加によって、まったく誘導されなかった。以上のことから、DP細胞は、血管内皮細胞や白血球などでみられるような接着分子PECAM-1の発現を示さないことが明らかとなった。

采用高灵敏度免疫印迹分析方法研究细胞生长因子EGF和bFGF对人牙髓细胞（DP细胞）中粘附分子血小板内皮细胞粘附分子-1（PECAM-1）表达的影响。将临床分离的DP细胞培养至汇合后，添加典型细胞生长因子、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)至预定浓度，使其在0.8的范围内作用48小时。、4、20、100 纳克/毫升。经过预定时间后，使用含有表面活性剂的提取缓冲液(例如Triton X-100)收集细胞膜级分，并将其用作免疫印迹的样品。测定各样品的蛋白浓度后，进行SDS-PAGE，蛋白量为10μg/泳道。使用硝酸纤维素膜进行蛋白质印迹后，进行封闭。然后，分别使抗人PECAM-11一抗和HRP标记二抗反应，并使用ECL Western blotting检测系统和X射线胶片检测发光信号。结果，获得了以下发现。 (1)在无血清培养基条件下、无刺激的情况下，DP细胞在蛋白水平上不表达PECAM-1。 (2)添加EGF和bFGF完全不诱导DP细胞中PECAM-1蛋白表达。由上可知，DP细胞不表达血管内皮细胞和白细胞中所见的粘附分子PECAM-1。