樹状細胞の遺伝子操作によるがん免疫強化法に関する研究

研究如何通过树突状细胞的基因操作增强癌症免疫力

基本信息

批准号：
13218093
负责人：
西岡安彦
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218093/
关键词：
癌免疫遺伝子遺伝子治療樹状細胞

项目摘要

ヒト末梢血単球よりGM-CSFとIL-4を用いて誘導した樹状細胞を用い、ヒト樹状細胞への遺伝子導入法の確立を目指した研究を行った。まずアデノウイルスベクターAxCAEGFPを作成し遺伝子導入効率を検討した。通常の感染方法では、アデノウイルスを用いた場合においても高い効率で遺伝子導入するには高濃度のウイルスが必要であった。一方、アデノウイルス感染時に37℃で2000xg、2時間の遠心を併用することで10〜50MOIでも遺伝子導入効率は80%以上に向上すると共に、遺伝子発現強度も有意に増加した。また、本法で遺伝子導入した樹状細胞の生存率は遺伝子導入をしていない樹状細胞のそれと同等で、混合リンパ球反応におけるリンパ球増殖刺激効果も保たれており、樹状細胞へのダメージは認められなかった。そこでアデノウイルスベクターを用いてヒト単球由来樹状細胞へのインターロイキン12(IL-12)遺伝子導入を行い、その免疫学的性状を解析した。我々の開発した遠心法を用いてAxlCihp40ip35を感染させたところ、経時的にIL-12p70の産生が認められ、48時間で8.lng/10*6cellsのIL-12産生を得た。IL-12遺伝子導入樹状細胞の表面抗原発現では、コントロールのEGFP遺伝子を導入した樹状細胞と比較してCD80、CD83、CD86、HLA classI、classIIの発現増強を認め、やや成熟した表現形を示した。しかし、FITC-デキストランを用いた貧食能の検討ではコントロールの樹状細胞と同程度の貧食能を認めた。またIL-12遺伝子導入ヒト樹状細胞の免疫増強効果を、アロ及びオートのヒト混合白血球反応を用いて検討した。その結果、いずれの反応においてもIL-12遺伝子導入樹状細胞は、コントロールのEGFP遺伝子導入樹状細胞に比較して、リンパ球刺激活性の著しい増強を認めた。以上からヒト樹状細胞に対してもIL-12遺伝子導入が可能であり、IL-12遺伝子導入ヒト樹状細胞は強力な免疫増強作用を有することが示唆された。

我们进行的研究旨在建立一种使用 GM-CSF 和 IL-4 从人外周血单核细胞诱导的树突状细胞将基因转移到人树突状细胞中的方法。首先，我们创建了腺病毒载体 AxCAEGFP 并检查了其基因转移效率。在传统的感染方法中，即使使用腺病毒，也需要高浓度的病毒以实现高效的基因转移。另一方面，在腺病毒感染过程中，通过在37℃、2000xg离心2小时，即使在MOI为10至50时，基因转移效率也提高至80%以上，并且基因表达强度也显着增加。另外，采用该方法转染基因的树突状细胞的存活率与未转染基因的树突状细胞相当，并且保持了混合淋巴细胞反应中的淋巴细胞增殖刺激作用，并且未观察到对树突状细胞的损伤。。因此，我们使用腺病毒载体将白细胞介素12（IL-12）基因导入人单核细胞来源的树突状细胞中，并分析其免疫学特性。当使用我们开发的离心方法感染AxlCihp40ip35时，随着时间的推移观察到IL-12p70的产生，并且在48小时内获得了8.lng/10*6个细胞的IL-12产生。关于转染IL-12基因的树突状细胞的表面抗原表达，我们观察到与转染对照EGFP基因的树突状细胞相比，CD80、CD83、CD86、HLA I类和II类的表达增强，表明表型稍微成熟。显示。然而，当使用 FITC-葡聚糖检查寡噬能力时，发现寡噬能力与对照树突状细胞相当。此外，使用同种异体和自体人类混合白细胞反应研究了 IL-12 基因转染的人树突状细胞的免疫增强作用。结果，在所有反应中，与对照EGFP基因转染的树突细胞相比，IL-12基因转染的树突细胞显示淋巴细胞刺激活性显着增加。综上所述，提示IL-12基因可以导入人树突状细胞中，且导入IL-12基因的人树突状细胞具有较强的免疫增强作用。