ギャップ結合による肝がん発生の抑制メカニズム

间隙连接抑制肝癌发展的机制

基本信息

批准号：
13216083
负责人：
小島隆
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216083/
关键词：
ギャップ結合タイト結合肝細胞増殖分化シグナル伝達

项目摘要

ギャップ結合とくにCx32が肝がん発生を抑制するメカニズムを解明するために,今回我々は,培養肝細胞を用いて、Cx32と肝細胞の増殖および分化に焦点を絞って検討した。さらに肝細胞の増殖あるいは増殖抑制に重要な役割をもち、ギャップ結合蛋白の発現調節にも関与する可能性があるMAPK,PI3K,p38MAPKによるシグナル伝達経路においても同様にin vitroで検討した。1.ギャップ結合の肝細胞の増殖および分化への関与の解析Cx32ノックアウトマウスから作製した初代培養肝細胞、さらにその細胞を継代により不死化させ、ヒトCx32を遺伝子導入した肝細胞株を用いて解析した結果、Cx32ノックアウトマウスの初代培養肝細胞では、正常マウスと比較してstress actinおよび細胞増殖度の増加がみられた。Cx32遺伝子導入肝細胞株では、増殖抑制はみられないものの、上皮分化の指標であるタイト結合蛋白およびその機能の増加、circumfential actin形成の増強も認められた。このタイト結合の発現誘導は、Cx32変異遺伝子、Cx26およびCx43遺伝子の導入ではみられず、コミュニケーション阻害薬剤でも抑制が認められた。以上の結果は、Cx32の発現およびそのコミュニケーション能は、正常肝細胞では増殖よりむしろ分化に密接に関与している可能性が考えられた。2.シグナル伝達によるギャップ結合の発現調節機構の解析ギャップ結合高発現初代培養ラット肝細胞を用いて,増殖刺激のオンオフによるin vitro再生肝モデルを作製し,シグナル伝達経路であるMAPK,PI3K,p38MAPKの各inhibiter(PD98059,LY294002,SB23850)を処置した結果、増殖刺激によるギャップ結合の発現および機能の変化は、MAPKおよびp38MAPK経路で調節されていることが明らかになった。

为了阐明间隙连接（特别是 Cx32）抑制肝癌发展的机制，我们使用培养的肝细胞重点研究 Cx32 和肝细胞增殖和分化。此外，我们同样在体外研究了MAPK、PI3K和p38MAPK的信号转导通路，它们在肝细胞增殖或抑制增殖中发挥重要作用，也可能参与调节间隙连接蛋白的表达。 1.使用由传代永生化的Cx32敲除小鼠制备的原代培养的肝细胞和用人Cx32转染的肝细胞细胞系来分析间隙连接在肝细胞的增殖和分化中的参与。与正常小鼠相比，Cx32 敲除小鼠的应激肌动蛋白和细胞增殖有所增加。在Cx32基因转染的肝细胞系中，虽然没有观察到增殖抑制，但也观察到作为上皮分化指标的紧密连接蛋白及其功能的增加，以及周围肌动蛋白形成的增强。当引入Cx32突变基因、Cx26和Cx43基因时，没有观察到这种紧密连接表达的诱导，并且即使使用通讯阻断药物也观察到抑制作用。上述结果提示，正常肝细胞中Cx32的表达及其通讯能力可能与分化而非增殖密切相关。 2.信号转导调控间隙连接表达的机制分析。通过建立体外再生肝模型并处理MAPK、PI3K和p38MAPK信号转导途径的每种抑制剂（PD98059、LY294002、SB23850），我们发现由于增殖刺激导致间隙连接的表达和功能发生变化是由 MAPK 和 p38MAPK 途径引起的，很明显它是受调节的。