肝細胞の増殖および分化におけるgap junctionの発現調節機構の解明

阐明间隙连接表达在肝细胞增殖和分化中的调控机制

基本信息

批准号：
08770162
负责人：
小島隆
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770162/
关键词：
ギャップ結合肝細胞初代培養増殖分化

项目摘要

、細胞間のcommunicationに重要は役割を果たしているgap junctionは、細胞の増殖および分化に密接に関係している。肝臓のgap junctionは発生、再生時或いは発癌過程に著しい変化がみられることが知られているが、その時のgap junctionの発現調節機構についてはよくわかっていない点が多い。最近我々は、初代培養ラット肝細胞計に於いて、分化誘導物質である2%dimethylsulfoxide(DMSO)および生理的濃度のglucagonを投与することにより肝細胞のgap junctionの構成蛋白であるconnexin32(Cx32)およびconnexin26(Cx26)を高度に再発現させ、且つ長期にその発現を維持させることに成功した。さらにこの培養系を用いて、gap junctionを高度に発現維持し増殖が抑制されている細胞をepidermal growth factor(EGF)刺激により60%以上の細胞をDNA合成に入れ、DMSO投与により再び増殖抑制させる系、いわゆるin vitroにおける再生肝-モデル系を確立した。今回は、このin vitro再生肝モデル系を用いて、培養肝細胞の増殖および分化におけるgap junctionの発現の変化を詳細に観察した。結果、gap JunctionのmRNAはG1期に一過性の増加後、S期直前に著しく減少し、細胞の増殖中は低レベルであった。増殖抑制刺激により早期にCx32 mRNAは元のレベルまで回復したが、Cx26 mRNAにおいては低レベルのままであった。蛋白、形態および機能レベルにおいてもほぼ同様の変化がみられた。また増殖抑制時においてfreeze fracture的にgap junction plaqueの細胞分化の指標であるcell poralityとの密接な関係もみられた。

间隙连接在细胞间通讯中发挥着重要作用，与细胞增殖和分化密切相关。众所周知，肝脏中的间隙连接在发育、再生和癌变过程中会经历显着的变化，但对于间隙连接表达的调节机制仍知之甚少。最近，我们通过向原代培养的大鼠肝细胞施用2%二甲基亚砜（DMSO）和生理浓度的胰高血糖素，研究了肝细胞间隙连接的组成蛋白connexin32（Cx32），我们成功地实现了高度再表达和表达。 connexin26 (Cx26) 并长期维持其表达。此外，使用该培养系统，用表皮生长因子（EGF）刺激维持高间隙连接表达且增殖受到抑制的细胞，以诱导60％以上的细胞进行DNA合成，并且DMSO施用再次抑制增殖。所谓的体外再生肝脏模型系统。在这里，我们利用这种体外再生肝模型系统来密切观察培养肝细胞增殖和分化过程中间隙连接表达的变化。结果，间隙连接mRNA在G1期短暂增加，然后在S期之前显着减少，并在细胞增殖过程中保持在低水平。抗增殖刺激后Cx32 mRNA迅速恢复至原始水平，但Cx26 mRNA仍处于较低水平。在蛋白质、形态和功能水平上观察到几乎相似的变化。此外，在生长抑制期间的冷冻骨折中也观察到与细胞多孔性的密切关系，细胞多孔性是间隙连接斑块中细胞分化的指标。