リンパ球性白血病に於けるウイルス蛋白によるセレクチンリガンド合成酵素の転写調節

淋巴细胞白血病中病毒蛋白对选择素配体合酶的转录调控

• 批准号: 13214122
• 负责人: 平岩 望
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214122/
• 关键词: セレクチンリガンド; fucosyltransferase VII; Tax蛋白; CRE; T-box; One-hybrid法; CREB; ATF; F7CAF-1

セレクチンリガンド合成糖転移酵素Fuc-T VII遺伝子のヒト成人T細胞白血病ウィルスHTLV-1 Tax蛋白により活性化されるpromoter領域内のenhancer部(CRE-like)にGel Shift AssayによりbZIP型転写因子以外に他の因子との相互作用を認め、酵母One-Hybrid法により既知のCREB/ATF転写因子と同時に、このenhancer部につながる新規のT-box型の転写因子(hF7CAF-1と命名)をクローニングした。このhF7CAF-1はJurkat T細胞にてFuc-T VII遺伝子転写活性を増大し、Taxによる活性化に対し相乗作用も認めた。さらにその効果の機構を解析するためにタグをつけた融合蛋白hF7CAF-1発現ベクターを用いin vivoでの他の因子との関連を検討したところ、Tax及びCREB-1と免疫沈降し相互作用の存在を確認した。またこの転写因子の組織別の発現パターンの検討のためNorthern blotにて解析したところhF7CAF-1はFuc-T VIIと比べ、正常組織での転写発現部位が末梢リンパ球、骨髄などで一致しており、また培養細胞株での検討でもHTLV-1感染T細胞株や刺激後のJurkat T細胞での発現増大を認め、Fuc-T VII遺伝子の発現に強い相関を示した。特に、metallothionein promoterによるTax発現誘導可能なJurkat T細胞(JPX-9細胞)でのTax発現に伴いFuc-T VII、hF7CAF-1遺伝子ともに強く転写誘導されており、Taxによる転写活性化機構に明らかに依存していることが示された。

凝胶转移至选择素配体合成糖基转移酶 Fuc-T VII 基因启动子区域的增强子区域（CRE 样），该基因由人类成人 T 细胞白血病病毒 HTLV-1 Tax 蛋白激活。通过测定证实了与bZIP型转录因子以外的其他因子的相互作用，并且酵母单杂交方法揭示了它与已知的CREB/ATF转录因子和连接到的新的T-box型转录因子(hF7CAF)相互作用。该增强子区域被克隆。该hF7CAF-1增加了Jurkat T细胞中Fuc-T VII基因的转录活性，并且还观察到了Tax对激活的协同作用。此外，为了分析这种作用的机制，我们使用标记的融合蛋白hF7CAF-1表达载体来检查与体内其他因素的关系，证实了其存在。此外，为了检查该转录因子在不同组织中的表达模式，使用Northern印迹分析表明，与Fuc-相比，hF7CAF-1在正常组织中的转录表达位点在外周淋巴细胞、骨髓等中是相同的。此外，在使用培养细胞系的研究中，在刺激后观察到 HTLV-1 感染的 T 细胞系和 Jurkat T 细胞的表达增加，显示出与 Fuc-T VII 基因表达的强相关性。特别是，由于 Jurkat T 细胞（JPX-9 细胞）中 Tax 表达，Fuc-T VII 和 hF7CAF-1 基因的转录均被强烈诱导，可以通过金属硫蛋白启动子诱导其表达 Tax，这一点很清楚从转录激活机制来看，Tax 是依赖的。