リンパ球性白血病に於けるウィルス蛋白によるセレクチンリガンド合成酵素の転写調節

淋巴细胞白血病中病毒蛋白对选择素配体合酶的转录调控

基本信息

批准号：
12213166
负责人：
平岩望
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213166/
关键词：
セレクチンリガンド fucosyltransferase VII Tax蛋白 CRE T-box One-hybrid法 CREB ATF bZIP

项目摘要

我々がクローニングに成功したセレクチンリガンド合成糖転移酵素Fuc-TVII遺伝子がHTLV-1 Tax蛋白により活性化され、enhancer部がLTR21-bpと相同の構造を持つとともに、その機序は、CREB/ATF転写因子を介した経路で更にprotein kinase A非依存性での活性化が可能であることを発見し、機能的相同性も認めた。そこには単に内因性のCRE領域と異なり、Fuc-T.VII遺伝子CRE-like enhancer部にはCREB/ATF転写因子以外に他の因子の関与が考えられた。そこで今回、CRE-like配列へのGel Shift AssayによりbZIP型転写因子以外に他の因子との相互作用を証明し、次に酵母One-HYbrid法により同部に結合する因子のクローニングを試みたところ、結合蛋白を100以上のクローンとして得ることが出来、シークエンシング等にて解析した。そしてCPEB/ATF転写蛋白因子と既知のTREB因子以外に、新規のT-box型の転写因子(hF7CAF-1と命名)を単離した。この新規因子のmRNAをNorthern Blot法にて調べたところHTLV-1感染T細胞株や刺激後のJurkat T細胞での発現増大を認めた。そこでhF7CAF-1の発現ベクターを作成し、Jurkatリンパ球でFuc-T VII遺伝子promoterのレポーター活性を測定したところ、約200%活性が上昇した。またTax単独時のレポーター活性上昇がhF7CAF-1併用により更に強まることを発見し、同遺伝子産物がTaxとの協調によるFuc-T VII遺伝子転写を増大することを認めた。このactivatorとしての作用は、CREB/ATF familyの一部の転写因子とも協調して働いていることを見出した。

我们成功克隆的选择素配体合成糖基转移酶Fuc-TVII基因被HTLV-1 Tax蛋白激活，增强子区具有与LTR21-bp同源的结构，其机制是CREB/ATF转录。通过因子介导的途径可以实现不依赖于蛋白激酶 A 的激活，并且还认识到功能同源性。与内源性CRE区域不同，除了CREB/ATF转录因子之外的其他因子被认为参与Fuc-T.VII基因的CRE样增强子区域。因此，我们使用Gel Shift Assay对CRE样序列证明了除bZIP型转录因子之外的其他因子的相互作用，然后尝试使用酵母One-HYbrid方法克隆与相同区域结合的因子。能够获得超过 100 个结合蛋白克隆，并通过测序和其他技术进行分析。除了CPEB/ATF转录蛋白因子和已知的TREB因子外，我们还分离出了一种新的T-box型转录因子（命名为hF7CAF-1）。当我们使用Northern Blot方法检查这个新因子的mRNA时，我们发现其表达在HTLV-1感染的T细胞系和刺激后的Jurkat T细胞中增加。因此，当我们创建hF7CAF-1的表达载体并测量Jurkat淋巴细胞中Fuc-T VII基因启动子的报告活性时，活性增加了约200%。我们还发现，当单独使用Tax时，报告基因活性的增加在与hF7CAF-1组合时进一步增强，并且证实相同的基因产物与Tax合作增加Fuc-T VII基因转录。我们发现这种激活剂作用还与 CREB/ATF 家族的一些转录因子协同作用。