プロテオームによるアルツハイマー病の病態解析法の開発

利用蛋白质组开发阿尔茨海默病病理分析方法

• 批准号: 13204047
• 负责人: 下濱 俊
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204047/
• 关键词: 脳神経疾患; アルツハイマー病; 痴呆; プロテオーム; 蛋白質; 二次元電気泳動; プロテオミクス; 脳神経疾患; アルツハイマー病; 痴呆; プロテオーム; 蛋白質; 二次元電気泳動; プロテオミクス

孤発例を主体とするアルツハイマー病では、生成されたタンパクを網羅的に検討し、その翻訳後修飾やタンパク相互作用を明らかにしてゆくことが重要である。ヒト脳においてはこのようなタンパクの多くはリン酸化や糖鎖付加などの翻訳後修飾をうけており、その変化がアルツハイマー病のプロテオーム変動に深く関わっている可能性がある。今回は、タンパクプロファイルの詳細を検討する目的で、脳タンパクをその分画ごとにプロテオーム解析(subproteomics)した。その結果、(1)脳の親水性タンパクについては、約800スポットをデータベース化し、主として質量分析装置を用いた同定を可能にした。疎水性タンパクについては独自に開発した可溶化条件で安定したプロファイリングが可能になり、約200のスポットをデータベース化したが親水性タンパクに比べ変動が大きかった。(2)正常対照群とアルツハイマー病群で脳タンパクの発現を比較し、親水性タンパク、疎水性タンパクとも有意に変動するスポットを確認した。(3)親水性脳タンパクの糖鎖付加を検討した。アルツハイマー病に特異的な変動は認めなかった。高分子量タンパクのプロファイリングが困難で、その理由として、IPGゲルの特性、可溶化過程での分解などが考えられた。また、塩基性タンパクのプロファイリングも困難で、その理由として、電気的浸透により、泳動結果に大きなゆがみや欠失を生じることが考えられた。抗リン酸化タンパク抗体を用いた方法ではスポットを確実に特定できなかった。今後、(1)アルツハイマー病で変化を示した微量タンパクの同定、(2)膜タンパクの分離及びタンパクのリン酸化の検出には、さらに方法論的にいくつかの試行錯誤が必要である。(3)今回行ったスポットごとの群間比較のみでなく、タンパクネットワーク中でのアルツハイマー病での変化を抽出する解析が必要である。

在主要是由零星病例引起的阿尔茨海默氏病中，重要的是要全面检查产生的蛋白质并阐明其翻译后修饰和蛋白质相互作用。在人脑中，这些蛋白质中的许多经历了翻译后修饰，例如磷酸化和糖基化，并且这些变化可能与阿尔茨海默氏病的蛋白质组学波动深深涉及。在本文中，我们为每个部分进行了脑蛋白的蛋白质组学分析，以检查蛋白质谱的细节。结果，（1）在大脑中亲水性蛋白的数据库中创建了大约800个斑点，从而可以主要使用质谱仪识别它们。对于疏水蛋白，在我们开发的溶解化条件下可能进行了稳定的分析，并且在数据库中创建了大约200个斑点，但是变异大于亲水蛋白的变化。 （2）比较了正常对照组和阿尔茨海默氏症组之间脑蛋白的表达，并确认了亲水性和疏水性蛋白质差异显着变化的斑点。 （3）我们研究了添加亲水性脑蛋白的糖基化。没有观察到阿尔茨海默氏病的具体变化。分析高分子量蛋白很困难，其原因包括IPG凝胶的特性及其在溶解过程中的分解。同样，碱性蛋白的分析很困难，原因是电渗透会在迁移结果中引起严重的扭曲和缺失。使用抗磷酸化蛋白抗体的方法不允许对斑点进行可靠的鉴定。将来，（1）鉴定痕量发生变化的阿尔茨海默氏病，（2）分离膜蛋白并检测蛋白磷酸化的痕量蛋白需要进行一些方法论试验和错误。 （3）除了比较斑点与其他地区之间的群体外，还必须分析蛋白质网络中阿尔茨海默氏病的变化。