プロテオームによるアルツハイマー病の病態解析法の開発

利用蛋白质组开发阿尔茨海默病病理分析方法

基本信息

批准号：
13204047
负责人：
下濱俊
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

孤発例を主体とするアルツハイマー病では、生成されたタンパクを網羅的に検討し、その翻訳後修飾やタンパク相互作用を明らかにしてゆくことが重要である。ヒト脳においてはこのようなタンパクの多くはリン酸化や糖鎖付加などの翻訳後修飾をうけており、その変化がアルツハイマー病のプロテオーム変動に深く関わっている可能性がある。今回は、タンパクプロファイルの詳細を検討する目的で、脳タンパクをその分画ごとにプロテオーム解析(subproteomics)した。その結果、(1)脳の親水性タンパクについては、約800スポットをデータベース化し、主として質量分析装置を用いた同定を可能にした。疎水性タンパクについては独自に開発した可溶化条件で安定したプロファイリングが可能になり、約200のスポットをデータベース化したが親水性タンパクに比べ変動が大きかった。(2)正常対照群とアルツハイマー病群で脳タンパクの発現を比較し、親水性タンパク、疎水性タンパクとも有意に変動するスポットを確認した。(3)親水性脳タンパクの糖鎖付加を検討した。アルツハイマー病に特異的な変動は認めなかった。高分子量タンパクのプロファイリングが困難で、その理由として、IPGゲルの特性、可溶化過程での分解などが考えられた。また、塩基性タンパクのプロファイリングも困難で、その理由として、電気的浸透により、泳動結果に大きなゆがみや欠失を生じることが考えられた。抗リン酸化タンパク抗体を用いた方法ではスポットを確実に特定できなかった。今後、(1)アルツハイマー病で変化を示した微量タンパクの同定、(2)膜タンパクの分離及びタンパクのリン酸化の検出には、さらに方法論的にいくつかの試行錯誤が必要である。(3)今回行ったスポットごとの群間比較のみでなく、タンパクネットワーク中でのアルツハイマー病での変化を抽出する解析が必要である。

阿尔茨海默病主要发生在散发病例中，全面检查产生的蛋白质并阐明其翻译后修饰和蛋白质相互作用非常重要。在人脑中，许多这些蛋白质会发生磷酸化和糖基化等翻译后修饰，这些变化可能与阿尔茨海默病的蛋白质组变化密切相关。这次，为了研究蛋白质谱的详细情况，我们对各组分中的脑蛋白质进行了蛋白质组学分析（亚蛋白质组学）。结果，(1)我们创建了一个包含大脑中约800个亲水蛋白点的数据库，使得主要使用质谱仪来识别它们成为可能。对于疏水性蛋白质，我们能够使用我们独特的溶解条件进行稳定的分析，并创建了约 200 个点的数据库，但波动大于亲水性蛋白质。 (2)我们比较了正常对照组和阿尔茨海默病组之间的脑蛋白表达，并确定了亲水性和疏水性蛋白显着变化的点。 (3)研究了亲水性脑蛋白的糖基化。没有观察到阿尔茨海默病特有的变化。分析高分子量蛋白质很困难，其原因被认为是 IPG 凝胶的特性及其在溶解过程中的降解。此外，分析碱性蛋白质也很困难，其原因被认为是电泳导致电泳结果出现较大的失真和缺失。使用抗磷酸化蛋白抗体的方法无法可靠地识别该斑点。将来，将需要进行一些方法学试验和错误来（1）识别显示阿尔茨海默病变化的痕量蛋白质，以及（2）分离膜蛋白并检测蛋白质磷酸化。（3）除了我们这次进行的逐点组比较之外，还需要进行分析以提取蛋白质网络中阿尔茨海默病的变化。