植物遺伝子の新しい温度依存的発現制御機構

植物基因的新温度依赖性表达控制机制

基本信息

批准号：
13017215
负责人：
射場厚
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13017215/
关键词：
イネ RFLP RNAポリメラーゼ葉緑体

项目摘要

(1)イネ核由来プラスチドRNA polymerase遺伝子の解析イネから、複数のプラスチド局在ファージ型RNA polymerase(NEP)遺伝子Osrpo Tpのクローンを単離し、それらの塩基配列を調べたところ、ORFの5'側に、367bpの欠失があるクローンが一定の割合で存在することを見出した。イネゲノムチーム(RGP)の完全長cDNAクローンと比較したところ、RGP由来のcDNAクローンの配列も同様の欠失を含んでいた。この欠失はフレームシフトを引き起こすため、活性のあるNEPは合成されないと考えられる。また、プラスチド局在型NEPに対する特異的ペプチド抗体を用いて、タンパク質レベルでのNEPの発現パターンを調べたところ、野生株においてはrpoBなど、NEPによって転写される遺伝子の転写パターンと一致していた。しかし、virescent変異株においては、葉の発生ステージ後期でrpoBのmRNA蓄積量が上昇するが、NEPタンパク量は逆に減少していた。このようなNEPの発現パターンはOsrpoTp mRNAの蓄積パターンと一致することから、NEPの翻訳後の活性化にvirescent遺伝子が関与することが示唆された。(2)イネvirescent遺伝子のクローニング(1)V_1遺伝子:遺伝子座近傍のAFLPをスクリーニングし、約1cMの距離にあるCAPSマーカーを見つけ、そこを基点に染色体歩行を進めている。(2)V_2遺伝子:V_2が座乗するBACクローンを同定し、V2の座乗領域を物理距離28kbpの範囲に絞り込んだ。アノテーションとcDNA検索の結果から、この領域上に2つの候補遺伝子を見いだし、その1つにアミノ酸置換を引き起こす点変異があることがわかった。(3)V_3遺伝子:第6染色体長腕側の約5.0cMの位置に存在する約40kbpの領域に絞り込んだ。アノテーションの結果から、この領域上に9個の候補遺伝子を見いだした。

(1)水稻核源质体RNA聚合酶基因的分析我们从水稻中分离了质体定位噬菌体型RNA聚合酶(NEP)基因Osrpo Tp的多个克隆，并检查了它们的核苷酸序列，发现一定比例的克隆。有 367bp 缺失。与水稻基因组小组 (RGP) 的全长 cDNA 克隆相比，RGP 衍生的 cDNA 克隆的序列包含相似的缺失。由于该缺失导致移码，因此认为活性 NEP 未合成。此外，当我们使用针对质体定位的 NEP 的特异性肽抗体在蛋白质水平上研究 NEP 的表达模式时，我们发现它与野生型菌株中 NEP 转录的基因（例如 rpoB）的转录模式相匹配。然而，在绿芽突变体中，在叶片发育后期，rpoB mRNA积累量增加，但NEP蛋白量减少。 NEP 的这种表达模式与 OsrpoTp mRNA 的积累模式一致，表明绿色基因参与 NEP 的翻译后激活。 (2)水稻绿绿基因的克隆 (1)V_1基因：我们筛选该基因位点附近的AFLP，发现位于1cM左右处的CAPS标记，并从那里进行染色体行走。 (2)V_2基因：鉴定出V_2所在的BAC克隆，并将V2所在的区域缩小到物理距离28kbp。根据注释和cDNA搜索结果，他们在该区域发现了两个候选基因，其中一个含有导致氨基酸取代的点突变。 (3)V_3基因：缩小至约40kbp的区域，位于6号染色体长臂侧约5.0cM处。根据注释结果，我们在该区域找到了9个候选基因。