アンジオテンシンIIタイプ2受容体特異的シグナル伝達物質のクローニング、機能解析

血管紧张素II 2型受体特异性信号转导器的克隆和功能分析

基本信息

批准号：
12877112
负责人：
堀内正嗣
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

アンジオテンシンIIタイプ1(AT1)受容体とアンジオテンシンIIタイプ2(AT2)受容体の発現バランス、クロストークが心血管病態において重要であることが認識され、その病態生理学的意義の解明が急がれている。AT2受容体も、AT1受容体と同様に7回膜貫通型受容体であり、膜貫通部位を除いてAT1受容体とその相同性は低く、全体として約34%の相同性を有している。AT1受容体が、Extracelluar signal-regulated kinases (ERK)をはじめ、種々のキナーゼを活性化するのに対し、AT2受容体は、SHP-1,MKP-1などの脱リン酸化酵素を活性化し、AT1受容体によるシグナルのブレーキとして、作用し、細胞増殖抑制、アポトーシス誘導等に働くと報告してきた。また、なかでも、SHP-1が、AT2受容体のシグナル特異性を決定するサードループに直接、リンクする可能性についても報告した。AT2受容体刺激によるSHP-1活性化の生理的意義について更に検討を行ったところ、SHP-1は、Epidermal Growth Factor (EGF)の脱リン酸化を促進したり、さらにインスリン受容体によるP13 Kinaseの不活性化に関与していることが見いだされ、SHP-1がAT2受容体を介する種々の生理作用に重要であることが明らかとなった。AT2受容体細胞内サードループアフィニテイカラムなどを用いた精製を試み、現在、37kDa,70kDaの2種類の異なった蛋白を得たので、アミノ酸配列等を確認しつつあり、70kDaの蛋白がAT2受容体の細胞内サードループに特定的に結合する可能性を示唆する結果を得ている。一部のシーケンスを用いcDNAをクローニングする予定である。同時に、High Throughput Screeningを行うべく、準備を進めている。さらに、AT1受容体のC-末端のみに特異的に結合するAT1 receptor associated protein (ATRAP)をクローニングし、ATRAPがAT1受容体に特徴的なインターナリゼイション、デセンシタイゼイションを引き起こし、血管平滑筋の増殖能を抑制する事、さらにATRAPが血管傷害、心肥大時にその発現が減少する事を報告してきたが、現在、その機能の解析を進めている。

人们已经认识到，血管紧张素II型1（AT1）和血管紧张素II 2型（AT2）受体的表达和串扰平衡在心血管病理学中很重要，并且其病理生理学意义紧急阐明了。 AT2受体也是一种七跨膜受体，就像AT1受体一样，除了跨膜位点外，与AT1受体同源，总体同源约为34％。据报道，AT1受体激活各种激酶，包括外卢尔信号调节激酶（ERK），而AT2受体激活诸如SHP-1和MKP-1之类的去磷酸化酶（例如SHP-1和MKP-1），可通过AT1受体对信号进行制动，并在抑制细胞扩散和诱导的Apoptosis中起作用。特别是，我们还报告了SHP-1可以直接连接到确定AT2受体信号特异性的第三个循环的可能性。进一步研究通过AT2受体刺激激活SHP-1激活的生理意义，表明SHP-1促进表皮生长因子（EGF）的去磷酸化（EGF），并参与胰岛素受体失活的p13激酶，表明SHP-1对于通过AT2受体介导的各种生理作用很重要。我们试图使用AT2受体的细胞内三环亲和柱进行纯化，现在已经获得了两种不同的蛋白质，37 kDa和70 kDa，现在正在证实氨基酸序列，并获得了70 kDa蛋白可以特异性结合的氨基酸序列。某些序列将用于克隆cDNA。同时，我们目前正在准备执行高吞吐量筛查。此外，我们已经克隆了AT1受体相关的蛋白（ATRAP），该蛋白仅与AT1受体的C末端特别结合，并报道ATRAP会导致AT1受体的内在化和脱敏特征，从而抑制了血管平滑肌肉的增殖能力，并且在其过程中的表达却降低了，但在其表达中却降低了其表达，并抑制了其表达的效果。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Nakagami, H., Cui, T.X., Iwai, M., Shiuchi, T., Takeda-Matsubara, Y., Wu, L., Horiuchi, M.: "Tumor Necrosis Factor-α Inhibits Growth Factor-Mediated Cell Proliferation Through SHP-1 Activation in Endothelial Cells"Arterioscler Thromb Vasc Biol.. 22. 238-2

Nakagami, H.、Cui, T.X.、Iwai, M.、Shiuchi, T.、Takeda-Matsubara, Y.、Wu, L.、Horiuchi, M.：“肿瘤坏死因子-α 通过抑制生长因子介导的细胞增殖内皮细胞中的 SHP-1 激活“动脉硬化血栓 Vasc Biol.. 22. 238-2

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通讯作者：

Cui, T.X., Nakagami, H., Takeda, Y., Shiuchi, T., Daviet, L., Nahmias, C., Horiuchi, M.: "Pivotal role of tyrosine phosphatase SHP-1 in AT2 receptor-mediated apoptosis in rat fetal vascular smooth muscle cell"Cardiovasc Res.. 49・4. 863-871 (2001)

Cui, T.X.、Nakagami, H.、Takeda, Y.、Shiuchi, T.、Daviet, L.、Nahmias, C.、Horiuchi, M.：“酪氨酸磷酸酶 SHP-1 在 AT2 受体介导的细胞凋亡中的关键作用大鼠胎儿血管平滑肌细胞”Cardiovasc Res.. 49・4. 863-871 (2001)