心筋細胞への新しい遺伝子導入法

心肌细胞新基因导入方法

• 批准号: 12877105
• 负责人: 小室 一成
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877105/
• 关键词: 心不全; 遺伝子導入; アデノウィルス; DEAE dextran; リン酸カルシウム法; リポフェクション法

1.in vitroにおける研究心臓における遺伝子治療の重要な問題点として、遺伝子導入効率の低いことがあげられる。そこでこれまで用いられていたリン酸カルシウム法やリポフェクション法よりも導入効率の高い方法の確立を目指し、研究をおこなった。まず培養細胞株で高い導入効率を示すことが報告されているアデノウイルス-DEAE dextran法が心筋細胞でも可能か否かを検討した。その前段階としてCOS細胞を用いて至適条件の決定のために、βガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼの遺伝子をアデノウイルスとDEAE dextranを用いて試験管内で架橋させた後、細胞導入し、βガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼ活性を測定した。この結果得られた至適条件下で、培養心筋細胞にβガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼの遺伝子を導入した。通常のリン酸カルシウム法やリポフェクション法では心筋細胞への遺伝子導入効率は1%以下であるが、この方法により10%近くの細胞に導入することが可能であった。またルシフェラーゼの遺伝子を導入した細胞から細胞抽出液を取り、ルシフェラーゼ活性を測定して、リン酸カルシウム法やリポフェクション法で遺伝子導入した場合と比較したところ数十倍の値が得られた。2.in vivoにおける研究今後、新たな心不全の治療法として心筋組織内への遺伝子導入法が期待される。そこで至適導入方法を調べるために、βガラクトシダーゼ遺伝子をアデノウイルスを用いて直接ラットの心臓に注入し、その発現効率をプラスミドDNAを注入した場合と比較した。アデノウィルスを用いることによりプラスミドDNAよりは広い範囲にわたって遺伝子導入が可能であった。

1。在体外研究基因治疗心脏中的一个重要问题是其基因转移效率低。因此，我们进行了研究，目的是建立一种与磷酸钙和脂肪触发方法相比，迄今为止使用的磷酸钙和Lipofection方法具有更高的效率。首先，我们研究了心肌细胞中的腺病毒葡萄糖方法是否在培养的细胞系中表现出很高的转导效率。为了确定使用COS细胞作为初步步骤的最佳条件，使用腺病毒和DEAE DEXTRAN在体外交联β-半乳糖苷酶和荧光素酶基因，然后将细胞转移以确定β-半乳糖苷酶和荧光素酶活性。在获得的最佳条件下，用β-半乳糖苷酶和荧光素酶基因转染培养的心肌细胞。通常的磷酸钙和脂肪触摸方法的基因转移效率小于1％，但是该方法允许将其引入近10％的细胞中。此外，从已转移的荧光素酶基因转移的细胞中采集细胞提取物，并测量荧光素酶活性，并获得了比使用磷酸钙或lipofection方法进行基因转移几十倍的值。 2。未来的体内研究，一种新的基因转移到心肌组织的方法将是一种新的心力衰竭治疗方法。为了研究最佳引入方法，使用腺病毒直接将β-半乳糖苷酶基因直接注入大鼠的心脏，并将表达效率与注入质粒DNA的表达效率进行比较。使用腺病毒允许基因转移在质粒DNA的范围更大。

项目成果

Aikawa R: "Insulin prevents cardiocytes from oxidative stress-induced apoptosis through actication of P13 Kinase/Akt."Circulation. 102. 2873-9 (2000)

Aikawa R：“胰岛素通过 P13 激酶/Akt 的激活，防止心肌细胞氧化应激诱导的细胞凋亡。”循环。

Shimoyama M: "Calcineurin inhabitor attenuates the development and induces the regression of cardiac hypertrophy in rats with salt-sensitive hypertension."Circulation. 102. 1996-2004 (2000)

Shimoyama M：“钙调神经磷酸酶抑制剂可减弱盐敏感性高血压大鼠心脏肥大的发展并诱导其消退。”循环。

小室一成: "先端医学社"心肥大・リモデリングとアンジオテンシンII 心血管系疾患とレニン・アンジオテンシン系-新世代のアンジオテンシンII受容体拮抗。. 2 (2000)

Kazunari Komuro：“Senshin Igakusha” 心脏肥大/重塑与血管紧张素 II 心血管疾病和肾素-血管紧张素系统 - 新一代血管紧张素 II 受体拮抗剂。

池田祐一: "先端医学社"β遮断機の心臓(心筋、冠、伝導)に関する作用。β-遮断機のすべて. 5 (2000)

Yuichi Ikeda：“Central Igakusha”β-受体阻滞剂对心脏（心肌、冠状动脉、传导）的影响。

Zhu W: "Functional analyses of three Csx/Nkx-2.5 mutations that cause human congenital heart disease."J Biol Chem. 275. 35291-6 (2000)

朱文：“导致人类先天性心脏病的三种Csx/Nkx-2.5突变的功能分析。”J Biol Chem。