ヒトがん関連遺伝子導入ハエを用いたがん治療薬の新規分子標的と新規抗がん剤の探索

利用转染人类癌症相关基因的果蝇寻找癌症治疗的新分子靶点和新的抗癌药物

基本信息

批准号：
12217176
负责人：
山口政光
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217176/
关键词：
GAL4-UAS標的発現系 p53 crumbs 遺伝子導入ハエ NPM-MLF1 TAF-1β SET-CAN armadillo shotgun

项目摘要

GAL4-UAS標的発現系を用いて、ヒトp53をショウジョウバエ複眼原基で発現させると細胞のG1期停止とアポトーシスの誘導がおこり、その結果として複眼の著しい形態異常(rough eye表現型)を引き起こす。このrough eye表現型を抑圧または、増強する突然変異をスクリーニングすることにより、p53の標的遺伝子や、p53機能の修飾遺伝子の同定が可能となる。これまでに、ショウジョウバエcrumbs遺伝子のコピー数の半減が、ヒトp53の発現により誘導されるrough eye表現型を増強することを見いだしていた。TUNEL法による解析で、crumbs遺伝子コピー数を半減させると、p53過剰発現により誘導される複眼原基でのアポトーシスがさらに増強されることがわかった。crumbsタンパク質は細胞のadherens junctionの形成に必須であることから、突然変異体との交配により、adherens junctionの他の構成因子、shotgun(E-cadherinのショウジョウバエホモログ)遺伝子やarmadillo(β-cateninのショウジョウバエホモログ)遺伝子コピー数を半減させてみたが、これらの場合も同様のrough eye表現型の増強が見られた。また、GAL4結合サイト(UAS)を持つプロモーターの支配下に、骨髄性白血病において見出された転座型融合遺伝子NPM-MLF1(奈良先端大・加藤規子博士より供与)あるいはTAF-Iβ/SET-CAN(東工大・永田恭介博士より供与)を置き、P-エレメントベクターに挿入後、受精卵に微量注入し、遺伝子導入ハエ系統を新たに樹立した。

使用GAL4-UAS靶表达系统在果蝇复合眼中的人p53表达导致细胞G1停滞和凋亡诱导，从而导致明显的复合眼形态异常（粗眼表型）。筛选抑制或增强这种粗糙眼表型的突变，可以鉴定p53和p53功能的修饰基因的靶基因。迄今为止，我们发现果蝇crumbs基因的一半拷贝数增强了人类p53表达引起的粗糙眼表型。 TUNEL方法的分析表明，将Crumbs基因的数量减半，进一步增强了由p53过表达诱导的化合物原始凋亡。由于Crumbs蛋白对于形成细胞粘附连接的形成至关重要，因此我们试图通过使粘附连接的其他成分的副本数量减半来减少粘附连接的其他成分因素的数量，shot弹枪（drosophila drosophila fift e-cadherin and e-cadherin）基因（drosation）基因（drosing onology with geners and geners and genering genering genering genering）generation generation generation generation generation generation generation。突变体，但在这些情况下，观察到了粗糙眼表型的类似增强。 Furthermore, under the control of a promoter with a GAL4-binding site (UAS), the translocation-type fusion gene NPM-MLF1 (donated by Dr. Kato Noriko, Nara University of Technology) or TAF-Iβ/SET-CAN (donated by Dr. Nagata Kyosuke, Tokyo Institute of Technology), which was found in myeloid leukemia, was placed, and after insertion into a P元素载体，对受精卵的微注射，建立了新的基因转导的跳蚤线。