DNA複製エラーを惹起するDNAポリメラーゼ・ゼータが発がん過程で果たす役割

DNA聚合酶zeta在致癌过程中的作用，它会导致DNA复制错误

基本信息

批准号：
12213149
负责人：
王継揚
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Chiba Cancer Center (Research Institute)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Polζのcatalytic subunitであるRev3のノックアウトマウスを中心に解析を行った。Rev3ホモ胚は胎生7.5日から胚胎組織の発生障害が認められ、胎生10.5日までに死滅した。また、7.5日以後の胚胎組織においては、広範なアポトーシスがTUNEL法により検出された。これらの結果から、Rev3は胚発生期の細胞の生存と増殖に必須であることが示された。また、p53-/-と交配した場合でも、Rev3-/-マウスにおける胎生致死がレスキューされないことから、Rev3欠損による胎生致死はp53非依存性であることが示された。さらに、ダブルノックアウト法によりRev3-/-ES細胞が得られないことも判明し、Rev3は胚発生のみならず、細胞の生存に必須であることが示された。一方、GSTとマウスRev3の融合蛋白質を利用して、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体を作成した。抗マウスRev3抗体を用いた細胞染色では、Rev3がreplication complexに局在することが示唆された。以上の結果より、哺乳類のPolζは損傷DNAの合成と突然変異の誘発に重要であるのみならず、細胞の生存そのものに必須であることが示唆された。一方、酵母においては、Polζは細胞の生存や増殖に必須ではないことから、哺乳類のPolζの機能については次の2つの可能性が考えられる。1.哺乳類のPolζは損傷DNAの複製以外に、何らかの形で通常のDNA複製に関わっている。2.哺乳類のPolζは酵母Polζと同様な機能しか持っていないが、哺乳類のゲノムが酵母に比べ格段に大きいために、多種多様なDNA損傷が発生する。そうした損傷の中にPolζによってのみ乗り越えられるものがある。

分析主要是在Rev3的敲除小鼠，POLζ的催化亚基上进行的。 Rev3 Homo胚胎通过从胎儿7.5的实施例中出现，并死亡10.5天。在7.5天，在实施方案组织中，通过TUNEL方法检测到广泛的凋亡。这些结果表明，Rev3对于胚胎发育期间细胞的存活和生长至关重要。同样，即使与p53 - / - 交叉，Rev3 - / - 小鼠中的胎儿致死也没有营救，表明由于Rev3缺陷引起的胎儿致死性是p53非依赖性的。此外，双基因敲除方法表明无法获得Rev3 - / - ES细胞，这表明Rev3不仅对于胚胎发育至关重要，而且对于细胞存活至关重要。另一方面，使用GST和小鼠Rev3的融合蛋白创建了多克隆抗体和单克隆抗体。在使用抗小鼠Rev3抗体的细胞染色中，建议Rev3定位于复制复合物中。以上结果表明，哺乳动物波尔术不仅对于损伤DNA的合成和突变的诱导至关重要，而且对于细胞存活本身至关重要。另一方面，在酵母中，Polζ对于细胞的存活或增殖不是必不可少的，因此哺乳动物Polζ有两种可能性。除了受损的DNA复制外，哺乳动物的POLζ参与正常的DNA复制。 2.哺乳动物波尔ζ的功能与酵母菌的功能相同，但是哺乳动物的基因组比酵母大得多，从而导致多种DNA损伤。这些损害中的一些只能通过波尔术克服。