ホルマリン固定・パラフィン包埋病理組織を用いた包括的エピジェネシス解析

使用福尔马林固定、石蜡包埋的病理组织进行全面的表观发生分析

• 批准号: 12204076
• 负责人: 北澤 荘平
• 金额: --
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204076/
• 关键词: 遺伝子プロモータ; CpGメチル化; 病理組織検体; BMP-6; サイクリンD1; 悪性腫瘍

ヒトゲノム解読の後には遺伝子発現制御機構の解析が重要性を増すことが予想される。私どもはラットのサイクリンD1遺伝子5′側上流領域をクローニングし、白血病細胞のサイクリンD1発現がプロモータ領域のCpGメチル化によってEpigeneticalに制御されることを示した。さらにCpGメチル化を組織形態と対応して解析するために、病理組織検体からCpGメチル化を検出する方法の基礎的検討を行った。即ち、ホルマリン固定パラフィン包埋の薄切標本をアガローズビーズに封入してDNAの化学的修飾やPCR・DNAシーケンスを行うことにより、微量検体からのCpGメチル化検出を可能にした(Lab Invest2000)。また、ヒト前立腺癌においてBMP-6遺伝子プロモータ領域のメチル化がBMP-6の転写を制御することを示し、前立腺癌の手術・剖検症例を用いた検索を行った。BMP-6mRNAは低分化型腺癌に高率に発現するとともに他臓器の転移浸潤部位では発現が高い傾向を示したが、micro dissectionで切出した腫瘍組織を用いてCpGメチル化の解析を行い、BMP-6発現がプロモータのSp1結合配列近傍のCpGメチル化によって制御されることを報告した(J Bone Miner Res,in press)。腫瘍の増殖・進展過程でCpGメチル化の変化により遺伝子発現(あるいは発現抑制)を来たし、転移浸潤に関わる生物学的特性を獲得する可能性が示唆された。私どもの方法論により、組織像に着目して標本の任意の部位で対象遺伝子のCpGメチル化の解析を行い「組織形態と対応した遺伝子制御研究」を進めるとともに、病理組織検体として集積されたゲノム資源を活用して疾患病態の解明を行うことが可能になる。以上の成果は第89回日本病理学会総会ワークショップ、第23回IAP総会シンポジウムにて発表した。

预计在破译人类基因组后，对基因表达控制机制的分析将变得越来越重要。我们在大鼠中克隆了细胞周期蛋白D1基因5'的上游区域，并表明白血病细胞中的细胞周期蛋白D1表达受启动子区域的CpG甲基化表观调节。此外，为了分析与组织形态的对应CpG甲基化，对检测病理组织样品中CPG甲基化的方法进行了基本研究。也就是说，通过封装琼脂糖珠的福尔马林固定石蜡包裹的标本，DNA和PCR和DNA测序的化学修饰，从痕量标本中检测CpG甲基化的检测是可能的（Lab Invest Invest 2000）。此外，人类前列腺癌中BMP-6基因启动子区域的甲基化控制BMP-6的转录，并使用前列腺癌的手术和尸检病例进行了搜索。 Although BMP-6 mRNA was expressed at a high rate in poorly differentiated adenocarcinomas and showed a high tendency to be expressed at metastatic invasion sites in other organs, we analyzed CpG methylation using tumor tissue excised by microdissection, and reported that BMP-6 expression is controlled by CpG methylation near the Sp1-binding sequence of the promoter (J Bone Miner Res, in press).已经提出，CpG甲基化的变化可以导致基因表达（或表达抑制），并且可以获取涉及转移性浸润的生物学特性。我们的方法将使我们能够分析标本中任何位点的靶基因的CPG甲基化，重点关注组织学，并进行“与组织形态学相对应的基因控制研究”，我们将能够利用作为病理组织标本积累的基因组资源来澄清病理病理。上述结果在日本病理学会和IAP股东大会第23股会议的第89届股东大会上介绍。

项目成果

Tamada H et al: "Methylation of CpG island of human bone morphogenetic protein-6 gene promoter alters its steady-state expression in prostatic lesion."J Bone Miner Res. (in press).

Tamada H 等人：“人骨形态发生蛋白 6 基因启动子的 CpG 岛甲基化改变了其在前列腺病变中的稳态表达。”J Bone Miner Res。

Yano S et al: "Association of decreased calcium-sensing receptor expression with proliferation of parathyroid cells in secondary hypreparathyroidism."Kidney Int. 58・11. 1980-1986 (2000)

Yano S 等人：“继发性甲状旁腺功能亢进症中钙敏感受体表达减少与甲状旁腺细胞增殖的关联”，Kidney Int. 58・11 1980-1986 (2000)。

Takeuchi K et al: "Immunohistochemical detection of PTHrPi in a squamous cell carcinoma arising from mature cystic teratoma causinh humoral hypercalcemia of malignancy."Gynecol Oncol. 79・3. 504-507 (2000)

Takeuchi K 等人：“对由成熟囊性畸胎瘤引起的恶性体液高钙血症进行的 PTHrPi 的免疫组织化学检测。”Gynecol Oncol 79·3 (2000)。

Sakamoto Y et al: "Methykation of CpG loci in 5'-flanking region alters steady-state expression of adenomatous polyposis gene in colon cancer cell line."J Cell Biochem. (in press).

Sakamoto Y 等人：“5 侧翼区域 CpG 位点的甲基化改变了结肠癌细胞系中腺瘤性息肉病基因的稳态表达。”J Cell Biochem。