SMXAリコンビナント近交系マウスを用いたアレルギー遺伝子の同定と解析

SMXA重组近交小鼠过敏基因的鉴定与分析

• 批准号: 12204053
• 负责人: 長谷川 好規
• 金额: --
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204053/
• 关键词: SMXA系マウス; 気管支喘息; 疾患感受性遺伝子座

我々はリコンビナント近交(RI)系マウスを用いて気管支喘息の遺伝要因のゲノム的解析を行ってきた。研究で用いるSMXAリコンビナント近交(SMXA-RI)系マウスは、SM/J系とA/J系マウスの両系間F2から交配を繰り返した30系統からなるRI系であり、既にSM/J系とA/J系間で全染色体上にわたる多型を示す約400遺伝子座についてStrain Distribution Patterns(SDP)が確定されている。多因子遺伝性疾患を解析する実験系としてSMXA-RI系マウスを用いる方法は理想的なものと思われる。気管支喘息は疾患自体が均一ではなく多様な病態の集合であると考えられるため、発症に関与している機序を即時型喘息反応(1.抗原特異的IgE値)、遅延型喘息反応(2.好酸球の気道への集積)、また気道過敏性などのように各病態に分けて解析する。本年度は即時型および遅延型喘息反応に関与する遺伝子のQTL解析を行った。実際には(1)SM/J系とA/J系マウスおよび30系統のSMXA-RI系マウスを用いてアラムとともに卵白アルブミン(OVA)により感作する。2度目の感作7日後により3日間OVAを吸入にて暴露し、感作前と最後の吸入日に採血し血清分離し、OVA特異的なIgE抗体をELISA法にて測定した。(2)上記と同様の処置後のマウスでEDTA加PBSを用いて気管支肺胞洗浄しサイトスピン後に染色し細胞分画を調べ好酸球の気道への集積度合いを測定した。以上の方法にて各SMXA-RI系マウスの各表現型を確認した。、30系統の約400遺伝子座のSDP情報を各系統ごとにすべてMAPMANAGERに入力し、さらに各系統の表現型も即時型、遅延型反応ごとに入力しQTL解析を行った。この方法により各系統の全染色体にわたる解析ができ、どの染色体のどこの部位に疾患感受性の遺伝子座があるかを同定した。即時型に関しては第2及び第15染色体上に各1個、また遅延型は第16染色体上に1個の有意なQTLを示す原因遺伝子座を同定した。今後未解析のRI系マウスの解析とさらなる遺伝子マーカーを用いて第2及び15染色体上の原因遺伝子座の領域を絞り込んで行くとともに、原因遺伝子の同定を試みる。

我们使用重组近交 (RI) 小鼠对支气管哮喘的遗传因素进行了基因组分析。研究中使用的SMXA重组近交系（SMXA-RI）小鼠品系是由SM/J和A/J小鼠品系之间的F2反复杂交的30个品系组成的RI品系，并且已经是SM/J品系的一个品系已确定大约 400 个基因座的菌株分布模式 (SDP)，这些基因座在 A/J 和 A/J 谱系之间的所有染色体上表现出多态性。使用 SMXA-RI 小鼠似乎是分析多因素遗传疾病的理想实验系统。由于支气管哮喘被认为是多种病理状况的集合，而不是同质的疾病，因此其发病机制可分为立即性哮喘反应（1.抗原特异性IgE水平）和迟发性哮喘反应（2.分析针对每种疾病状态（例如气道中嗜酸性粒细胞积聚）和气道高反应性单独进行。今年，我们对涉及立即和延迟哮喘反应的基因进行了 QTL 分析。在实践中，(1)用明矾和卵清蛋白(OVA)致敏SM/J和A/J小鼠以及30个品系的SMXA-RI小鼠。第二次致敏后7天，受试者通过吸入方式接触OVA 3天，致敏前和吸入最后一天采血，分离血清，并通过ELISA测定OVA特异性IgE抗体。 (2)与上述相同的处理后，用添加EDTA的PBS对小鼠进行支气管肺泡灌洗，细胞离心，染色以检查细胞级分并测量气道中嗜酸性粒细胞积聚的程度。使用上述方法确认每只SMXA-RI小鼠的每种表型。将每个菌株的30个菌株的约400个位点的所有SDP信息输入MAPMANAGER，并且还输入每个菌株的表型以用于QTL分析的即时和延迟反应。使用这种方法，我们能够分析每个谱系的所有染色体，并确定哪些染色体以及疾病易感位点所在的位置。我们在 2 号和 15 号染色体上确定了一个因果基因座，属于立即型，在 16 号染色体上确定了一个因果基因座，属于延迟型。今后，我们将利用对未分析的RI小鼠的分析和其他遗传标记来缩小2号和15号染色体上致病基因位点的范围，并尝试鉴定致病基因。