抗原受容体遺伝子の対立形質排除のメカニズム

抗原受体基因的等位排除机制

基本信息

批准号：
12051212
负责人：
西住裕文
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、抗原受容体遺伝子のV(D)J組み換えを制御する分子機構を解明する事を通して、最終的に対立形質排除の分子メカニズムを明らかにすることを目的としている。申請者らは、Igκ軽鎖遺伝子のV-J組み換えを負に調節する、3'エンハンサー(E3')領域内のPU.1結合配列に会合し、PU.1の働きと拮抗する別の蛋白質がリプレッサーとして存在すると想定してスクリーニングを行い、B細胞に限局して発現するPU.1に類似の遺伝子prf(PU.1 related factor)を単離した。そこでこの新規タンパク質Prfの生理的な機能を解明するために、prf遺伝子欠失マウスの樹立を試み成功した。このノックアウトマウスは、正常に成長し繁殖した。まずIgκ軽鎖遺伝子のV-J組み換え制御に関し遺伝子欠損の影響を調べたが、野生型と同様にV-J組み換えは厳密な制御を受けていた。引き続いて発現が限局しているB細胞を中心に詳細な解析を加えた。FACscanにより主としてB細胞の分化過程に異常がないか解析したが、野生型と大きな変化は見られなかった。また脾B細胞の種々の刺激に対する増殖応答活性にも野生型と大差はなかった。しかしprf遺伝子欠失マウスは無免疫状態において血清中に野生型より数倍高い量の抗体を含んでいることが明らかとなった。その抗体中には抗核抗体など自己抗体も含まれており、マウスを長期飼育しておくと自己免疫疾患様の症状を呈することが期待される。これまでの解析の結果において、遺伝子欠損の影響が余りみられなかった理由の一つに、Prfと類似の転写因子PU.1及びSpi-Bが、Prfの機能を相補していた可能性がある。よってprfとPU.1あるいはSpi-Bとの多重遺伝子欠損マウスを作製していく必要があると思われる。今後はprf遺伝子欠失マウスの解析を進めると共に、再度Igκ軽鎖遺伝子のV-J組み換えを負に調節するリプレッサー候補因子を単離する必要があり、現在新たなスクリーニング方法を導入し、遺伝了探索を試みている。

这项研究旨在通过阐明控制抗原受体基因的V（d）J修饰的分子机制来阐明最终性状排除的分子机制。申请人具有另一种蛋白质，其中PU.1在3“增强子（E3”）区域中的结合序列调整了IGκ光链基因的V-J重组，假设筛选是在按下进行筛选的。，以及类似于PU.1的遗传PRF（PU.1相关因子），该PU.1仅限于B细胞，分离为B细胞。因此，为了阐明这种新蛋白质PRF的生理功能，我们成功建立了PRF基因丢失的小鼠。这种淘汰小鼠已经成长并正常繁殖。首先，检查了IGκ轻链基因基因的V-J修饰对照的影响，但是严格控制V-J修饰以及野生型。详细的分析主要添加到B细胞中，该分析仅限于表达。 FACSCAN分析了B细胞的分化有任何异常，但没有看到重大变化。另外，在脾B细胞的各种刺激的增殖反应活性中，野生型没有很大的差异。然而，据揭示了PRF基因缺失小鼠在免疫态下血清中含有几倍的抗体。这些抗体还含有自动抗体，例如抗抗体抗体，而长期小鼠有望引起自身免疫性疾病的症状。到目前为止，在分析结果中没有太多的基因缺乏效果的原因之一可能使PU.1和SPI-B类似于PRF。因此，有必要在PRF，PU.1或SPI-B之间创建多个基因缺陷小鼠。将来，有必要分析PRF基因删除小鼠，并且再次有必要拒绝再次调节IGκ轻链基因V-J补偿的REPLESSELLESS候选因子，现在我们将引入一种新的筛选方法和新的筛选方法和探索我正在尝试的遗传。