3次元アッセンブリによる環境ホルモンターゲテイング系の効率化

利用 3D 组装提高内分泌干扰物靶向系统的效率

• 批准号: 12019266
• 负责人: 久保 いづみ
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019266/
• 关键词: リポソーム; 3次元アッセンブリ; ノニルフェノール; ビスフェノールA; ベンゾフェノン; フタル酸エステル; 構造変化; 吸光度測定

リポソーム及びタンパク分子から形成される3次元アッセンブリはリポソームの表面電荷密度とタンパク分子中の荷電密度のバランスにより直径1〜10μmの安定な3次元構造を形成する点に特徴があるが、環境ホルモンのような脂溶性の物質はこの3次元コンプレックスの疎水性領域に容易に浸透し、その構造に変化をもたらす。本研究では、この3次元アッセンブリを細胞膜のモデルとし、内分泌かく乱物質(環境ホルモン)を評価する方法と、その効率化について検討した。環境ホルモンとしては、ノニルフェノール、ベンゾフェノン,ビスフェノールA,フタル酸エステルをとり挙げた。あらかじめ調製された3次元アッセンブリに、それぞれの物質を室温、または37℃で作用させて、経時的に吸収スペクトル変化を計測した。3次元アッセンブリの構造が変化することにより、この粒子による光散乱に変化が生じた。この変化は37℃、300nmで最も顕著であったため、300nmにおけるみかけの吸収変化を指標とした。また、ノニルフェノールについては、測定後のスペクトルを平滑化処理することにより、10ppb〜100ppbの範囲での計測が可能であった。ベンゾフェノン、ビスフェノールA,フタル酸エステルであるbutylbenzyl-phthalateについては、いずれも0.1〜1ppmの範囲で計測が可能であったが、時間変化は物質毎に異なり、ビスフェノールAやベンゾフェノンでは10時間後、butylbenzyl-phthalateは12時間後、ノニルフェノールは24時間後が最適であった。環境ホルモン作用のないラウリル酸では変化が見られず、わずかな作用がある、dimethylphthalateでは変化はほとんどなかった。

脂质体与蛋白质分子形成的三维组装体的特点是，由于脂质体表面电荷密度与蛋白质分子内电荷密度的平衡，形成直径为1～10μm的稳定三维结构。脂溶性物质很容易渗透到这种三维复合物的疏水区域，引起其结构的变化。在这项研究中，我们使用这种三维组装体作为细胞膜的模型，研究了一种评估内分泌干扰物（内分泌干扰物）的方法以及如何提高其效率。选择壬基酚、二苯甲酮、双酚A和邻苯二甲酸酯作为环境激素。将每种物质在室温或 37°C 下应用到预先制备的三维组件上，并测量吸收光谱随时间的变化。三维组件结构的变化导致颗粒光散射的变化。由于该变化在37℃、300nm下最为显着，因此使用300nm下的表观吸光度变化作为指标。另外，对于壬基苯酚，通过使测定后的光谱平滑化，能够在10ppb～100ppb的范围内进行测定。二苯甲酮、双酚A、邻苯二甲酸酯的邻苯二甲酸丁苄酯均可以在0.1～1ppm的范围内测定，但时间变化因物质而异，双酚A、二苯甲酮则邻苯二甲酸丁基苄酯在12小时后最佳，壬基酚在24小时后最佳。月桂酸没有观察到任何变化，它没有环境激素作用，只有轻微的影响，而邻苯二甲酸二甲酯几乎没有变化。

项目成果

I.Kubo,H.Nagai: "Sulfate Binding Protein Modified Electrode as A Chemical Sensor"IEICE Transactions on Electronics. E83-C. 1035-1039 (2000)

I.Kubo，H.Nagai：“硫酸盐结合蛋白修饰电极作为化学传感器”IEICE Transactions on Electronics。

I.Kubo,K.Motoya and T.Ooseki: "Evaluation of environmental Endocrine Disruptor Based on its affinity of bR/liposome Complex"Proc.ISEB 2000. (in press).

I.Kubo、K.Motoya 和 T.Ooseki：“基于 bR/脂质体复合物的亲和力评估环境内分泌干扰物”Proc.ISEB 2000。（出版中）。

I.Kubo: "Investigation of detection system of environmental endocrine disruptors based on alteration of the structure of bR liposome complex"Technical report of IEICE. CPM2000-30. 7-12 (2000)

I.Kubo：“基于改变bR脂质体复合物结构的环境内分泌干扰物检测系统的研究”IEICE技术报告。