内分泌攪乱物質が核内受容体の標的遺伝子転写活性に与える影響の分子機構の解析

内分泌干​​扰物影响核受体靶基因转录活性的分子机制分析

• 批准号: 11839032
• 负责人: 臼井 健
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Research Institute for Production Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11839032/
• 关键词: 内分泌撹乱物質; 核内受容体; 生薬; ビスフェノールA; 転写活性; 培養細胞

今年度は、各種核内受容体とGAL4のDNA結合領域(GAL4DBD)とのキメラプラスミドの構築を完成した。これらのプラスミドをGAL4-Luciferaseレポーター遺伝子(GAK-Luc)およびコントロールプラスミド(pRL-SV4,pRL-TK)とともに培養細胞(tsA201)に導入し、各種漢方薬生薬成分および化学物質ピスフェノールAを添加してレポーター活性(ルシフェラーゼ活性)の変化をルミノメーターにて検討した。その結果、培養細胞系において、いくつかの生薬に、エストロゲン受容体(Erα)、ビタミンD受容体(VDR)、PPARγに対して、疑似リガンドと成り得る成分が含まれている事が明らかになった。これらはいずれも培養細胞系において用量依存的にレポーター遺伝子の活性を上昇させた。これらの生薬成分に関してこれらに含まれる既知の化学物質について更に検討を加えて、内分泌作用を示す物質を同定する。このことは漢方薬の生薬成分にいわゆるpytoestogen(植物エストロゲン)様作用を有する成分が含まれている可能性を示すのみならず、種々の核内受容体に対して作用しうる成分が含まれている可能性を示唆するものである。一方甲状腺ホルモン受容体に対しては、甲状腺ホルモンに対してアンタゴニスチックに作用する生薬成分が存在した。またビスフェノールAはこれまで知られている、エストロゲン作用に加えて、甲状腺ホルモン受容体に対してアンタゴニスチックに作用する可能性が示唆された。

今年，我们在各种核受体和GAL4（GAL4DBD）的DNA结合区域之间完成了嵌合质粒的构建。将这些质粒与GAL4-荧光素酶报告基因（GAK-LUC）和对照质粒（PRL-SV4，PRL-TK）一起引入培养细胞（TSA201），以及使用透明酶活性的变化中添加了用于检查中的变化。结果，可以发现在培养的细胞系中，某些草药包含可以是雌激素受体（ERα），维生素D受体（VDR）和PPARγ的成分。所有这些都以剂量依赖性方式增加了报告基因在培养细胞系中的活性。将对这些草药成分中包含的已知化学物质进行进一步的研究，以鉴定表现出内分泌作用的物质。这不仅表明，中草药的草药成分可能包含具有类似pytoestogen的作用的成分，而且还表明它们可能包含可以对各种核受体作用的成分。另一方面，甲状腺激素受体具有与甲状腺激素作用的草药成分。还有人提出，除了先前已知的雌激素作用外，双苯酚A除了先前已知的雌激素作用外，还可以对甲状腺激素受体起作用。

项目成果

Nakamura Y.,Usui T.,Nakao K.et al.: "Characterization of Prophet of Pit-1 gene expression in normal pituitary and pituitary adenomas in humans"Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 84. 1414-1419 (1999)

Nakamura Y.、Usui T.、Nakao K.等人：“人类正常垂体和垂体腺瘤中 Pit-1 基因表达的 Prophet 特性”临床内分泌与代谢杂志。