血管作働性物質によるマキシK_<Ca>チャネル修飾機構の分子機序と生理的意義

血管活性物质修饰maxi-K_<Ca>通道的分子机制及生理意义

基本信息

批准号：
11694319
负责人：
田中芳夫
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)本研究の最終目的である「生理活性物質によるマキシK_<Ca>チャネルの制御機構の分子機序の解明」を達成するための足がかりを固める目的で、動脈の収縮/弛緩を惹起するアラキドン酸代謝物であるトロンボキサンA_2/プロスタサイクリンによるマキシK_<Ca>チャネルの制御機構を検討した。(2)ブタ冠動脈から単離した平滑筋細胞を利用したパッチクランプ実験(inside-out記録)により、トロンボキサンA_2の安定誘導体であるU46619がマキシK_<Ca>チャネル活性を有意に抑制することを見出した。(3)U46619によるマキシK_<Ca>チャネルの抑制は、ホスホリパーゼCの活性化を介さず、G-蛋白依存性の機構が関与する可能性が示された。(4)U46619はクローン化マキシK_<Ca>チャネル(α)に対しても抑制を示したことから、チャネル活性を直接抑制する可能性も示唆された。(5)プロスタサイクリン安定誘導体であるベラプロストナトリウムによるモルモット大動脈標本の弛緩作用がイベリオトキシンにより強力に抑制されたことから、主としてマキシK^+チャネル活性化を介することが示された。(6)ベラプロストナトリウムによるモルモット大動脈標本の弛緩はアデニル酸シクラーゼ阻害薬により抑制されず、cAMP非依存性の機構を介する可能性が示唆された。(7)モルモット大動脈標本の単離平滑筋細胞を用いてマキシK^+チャネル活性を測定したところ、ベラプロストナトリウムがG-蛋白依存性にチャネル活性化を促進する可能性が示された。(8)以上の結果から、トロンボキサンA_2/プロスタサイクリンによる血管の収縮/弛緩にマキシK^+チャネルが重要な役割を果たしていることが示唆された。既に、cAMPの定量実験に着手しており、生化学的見地からのアプローチも試みている段階である。

(1) 诱导动脉收缩/舒张，为实现本研究的最终目标“阐明生理活性物质控制maxi-K_<Ca>通道的分子机制”奠定基础。我们研究了血栓素 A_2/前列环素（一种花生四烯酸代谢物）对 maxi-K_<Ca> 通道的调节机制。 (2)使用从猪冠状动脉分离的平滑肌细胞进行的膜片钳实验（由内而外记录）表明，U46619是血栓素A_2的稳定衍生物，我发现它显着抑制maxi-K_<Ca>通道活性。 (3)U46619对maxi-K_<Ca>通道的抑制不是由磷脂酶C激活介导的，但可能涉及G蛋白依赖性机制。 (4)U46619还抑制克隆的maxi-K_<Ca>通道(α)，表明它可能直接抑制通道活性。 (5)稳定的前列环素衍生物贝前列素钠对豚鼠主动脉制剂的舒张作用被伊贝里奥毒素强烈抑制，表明舒张作用主要是通过maxi-K^+通道激活介导的。 (6)贝前列素钠诱导的豚鼠主动脉标本的舒张不受腺苷酸环化酶抑制剂的抑制，表明舒张可能是由不依赖于cAMP的机制介导的。 (7)使用来自豚鼠主动脉标本的分离的平滑肌细胞测量maxi-K^+通道活性表明贝前列素钠可以以G蛋白依赖性方式促进通道激活。 (8)上述结果提示maxi-K^+通道在血栓素A_2/前列环素诱导的血管收缩/舒张中发挥重要作用。我们已经开始了cAMP的定量实验，也正处于从生化角度尝试方法的阶段。