植物の胚発生とインドール-3-酢酸(IAA)生合成の場

植物胚胎发育和吲哚-3-乙酸（IAA）生物合成的场所

基本信息

批准号：
11163221
负责人：
小柴共一
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

1)IAAld酸化酵素の生理的役割の検討我々がシロイヌナズナでIAA生合成への関与の可能性を示したIAAld酸化酵素の過剰発現形質転換体を作成した。これまでに、少なくとも8ラインの独立なラインが単離され、その表現型を解析してきたが、現在の所、過剰発現株において野生型と比較して有意に異常な表現型は認められていない。2)温度感受性胚性死突然変異体の探索現在1次候補として温度感受性を示す可能性のあるものが6ライン単離できている。それらの種子を現在制限温度(22℃)と許容温度(16℃)で育成中である。3)ニンジン不定胚を用いたオーキシンの胚発生への関与効率は悪いが、ニンジンを用いて不定胚形成の系が確立した。今後、遺伝子導入の系を確立させ、レポーター遺伝子を導入して実験を進めていく予定である。4)ABP1と直接相互作用するタンパク質の探索輸送シグナルを持つABP1と、輸送シグナルを持たないABP1を酵母内で発現させた。その結果シグナルペプチドを含み、ER retention signalを含まないコンストラクトが酵母内でtwo hybrid systemに利用できることが明らかになった。このコンストラクトと、独立なクローンを約150万個もつ花芽由来のcDNAライブラリーを用いて2回独立にスクリーニングを行った。1回目は、約10万個のコロニーをスクリーニングし、330個も1次候補を得た。2回目は約476万個のコロニーをスクリーニングし、約11200個の1次候補を得た。現在1回目のスクリーニングの1次候補からの解析を進めており、2次スクリーニング(キュアリングテスト)により217個の候補を得た。

1) IAAld 氧化酶的生理作用的检查我们在拟南芥中创建了过表达 IAAld 氧化酶的转化体，该酶已被证明参与 IAA 生物合成。迄今为止，已分离出至少八个独立品系并分析了它们的表型，但迄今为止，与野生型相比，在过表达品系中尚未观察到明显异常的表型。 2）寻找温度敏感的胚胎死亡突变体我们目前已经分离出六种可能表现出温度敏感性的品系作为主要候选者。这些种子目前正在限制温度（22℃）和允许温度（16℃）下生长。 3)虽然利用胡萝卜体细胞胚生长素参与胚胎发育的效率较低，但利用胡萝卜建立了体细胞胚形成系统。未来我们计划建立基因导入体系，导入报告基因，并进行实验。 4) 寻找与ABP1直接相互作用的蛋白质我们在酵母中表达了带有转运信号的ABP1和不带有转运信号的ABP1。结果表明，含有信号肽但不含 ER 保留信号的构建体可用于酵母的双杂交系统中。使用该构建体和包含约 150 万个独立克隆的花芽衍生 cDNA 文库进行了两次独立筛选。第一轮筛选了约10万个菌落，获得了330个初步候选菌落。第二轮筛选了约476万个菌落，获得了约11,200个初选菌落。目前我们正在对第一轮筛选的初步候选者进行分析，并通过第二轮筛选（固化测试）获得了217名候选者。