分裂組織におけるメチオニン生合成制御の分子機構

分生组织中蛋氨酸生物合成控制的分子机制

基本信息

批准号：
11163201
负责人：
内藤哲
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遊離メチオニンを過剰に蓄積するシロイヌナズナのmtol変異株を用いた研究により,メチオイニンン生合成の鍵となる段階を触媒するシスタチオニンγ-シンターゼ(CGS)の遺伝子はmRNAの安定性のレベルでフィードバック制御を受けており,しかもこの制御にCGSタンパク質の第1エキソンポリペプチドが関与していることが明らかになった.35Sプロモーター〓CGS第1エキソン〓GUSを持つトランスジェニック・シロイヌナズナから液体培養カルスを誘導し,メチオニンの効果をmRNAレベルで調べた.その結果,野生型の第1エキソンを持つ株のGUSmRNAのレベルはメチオニン添加により減少したのに対して,mtol変異型の第1エキソンを持つ株では減少は見られなかった.これまでCGS第1エキソンの機能解析は一過的発現系におけるレポーター活性により行ってきたが,この結果は,CGS第1エキソンが実際にmRNAレベルでの制御に機能を持つことを示している.また,培養細胞ラインを用いた一過的発現系の確立を行った.野生型とmtol-1変異型のCGS第1エキソンについて,35Sプロモーター*CGS第1エキソン〓GUSをタバコBY2細胞に電気穿孔法により導入して一過的発現を調べたところ,シロイヌナズナの液体培養カルスを用いた場合と同様のメチオニン応答性を示した.この結果は,タバコBY2細胞が実験系として有望であることを示している.既にAgrobacteriumを用いて上記のDNAを導入した形質転換ラインを得ており,BY2に内在性のCGS遺伝子と導入遺伝子についてCGSmRNAの安定性の解析を行っている.

在拟南芥中使用MTOL突变体积累过多的蛋氨酸的研究表明，催化甲氨酸γ-合酶的基因（CGS）催化了蛋氨酸生物合成的关键阶段，是在mRNA稳定性的水平上进行反馈调节的，并且是CGS protein protuntion consuntun of cogs protuntion cons of cgs protuntion cons in Cons of cgs protectuntion cons in Cons of cogs of cogs of cogs protuncy。 35S启动子，CGS 1外显子，35S，来自转基因拟南芥，含GUS GUS的液体培养愈伤组织，并在mRNA水平上检查了蛋氨酸的作用。结果表明，通过添加蛋氨酸，菌株中的GUS mRNA水平降低了，而MTOL突变体第一外显子在菌株中未观察到降低。迄今为止，观察到CGS 1外显子的功能分析。该结果表明CGS 1外显子实际上具有调节mRNA水平的功能。此外，使用培养的细胞系建立了瞬态表达系统。在野生型和MTOL-1突变体中，CGS 1外显子GUS通过电穿孔引入烟草BY2细胞以检查瞬态表达，结果表明，与在拟南芥中使用液体培养的愈伤组织相同的蛋氨酸反应性。该结果表明烟草BY2细胞有望作为实验系统。使用农杆菌引入了与上述DNA的转化线，并且已经分析了CGS mRNA的稳定性，已分析了CGS基因和内源性元基于By2的CGS mRNA。