発現クローニングで単離したα1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素の機能解析

通过表达克隆分离的α1,4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的功能分析

基本信息

批准号：
11159204
负责人：
中山淳
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11159204/
关键词：
粘液細胞ムチン H.pylori

项目摘要

平成11年度は,発現クローニング法を用いてヒト胃のcDNAライブラリーより単離したα1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素(α4GnT)の特性について解析した.まず,胃粘膜を含む種々のヒト正常組織におけるα4GnTの発現部位を調べるため,α4GnTのC末端側17個のアミノ酸残基に対する特異抗体を作製し,免疫組織化学的に解析した.その結果,この酵素は胃粘膜の副細胞,幽門腺,十二指腸のブルンネル腺,胃粘膜化生を示した膵管上皮のゴルジ野で特異的に発現していたが,他の細胞では全く検出されなかった.副細胞のようなα4GnTを発現している粘液細胞では実際にGlcNAcα1→4Galβ残基を含む粘液が産生されていることから,in vivoにおいてもα4GnTはこの糖鎖の生合成に重要な役割を演じていることが明らかになった.次にGlcNAcα1→4Galβ残基がH.pyloriの接着に及ぼす影響を解析するため,H.pyloriは接着するがGlcNAcα1→4Galβ残基は発現していない胃癌培養細胞,AGS細胞に対して,α4GnT cDNAの遺伝子導入前後におけるH.pyloriの接着性の変化について解析した.その結果,H.pyloriのAGS細胞に対する接着性は遺伝子導入前後で有意な変化がなく,GlcNAcα1→4Galβ残基がH.pyloriの接着に積極的に関与する結果は得られなかった.さらにStanford G3 Radiation Hybrid Panelを用いた解析により,α4GnT遺伝子の染色体上の座が3p14.3であることを示した.ごく最近,私達はα4GnTが胃癌や膵癌細胞でも発現していることを見出した.今後はこのような癌細胞におけるGlcNAcα1→4Galβ残基の発現意義を明らかにしたい.

在1999财年，我们分析了α1,4-N-乙酰葡萄糖转移酶（α4GNT）的特征，该酶从人类胃的cDNA库中分离出来，首先是表达克隆方法为了检查组织中的α4GNT表达的一部分，制备了17个氨基酸的α4GNTC末端的特异性抗体，并在免疫态化学物质中进行了分析。胰腺上皮表明胃粘膜，但在其他细胞中也没有检测到它，但在其他细胞中也没有检测到α4GNT。已显示α4GNT在该糖链中也起着重要作用。细胞和α4GNTcDNA基因分析了幽门螺杆菌在前后的粘附性变化，结果，H. pylori对AGS细胞的粘附性在基因之前和之后没有显着变化，GlcNACα1→4GALβ残基在H.属于Stanford G3辐射杂交小组的粘附力，表明α4GNT基因染色体是3p14.3。我想阐明GlcNACα1→4GALβ残基在此类癌细胞中的重要性。