2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子発現パターンの網羅的解析

利用二维电泳综合分析特定基因缺失突变体的基因表达模式

基本信息

批准号：
11149222
负责人：
中山建男
金额：
$ 1.79万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)増殖期の枯草菌タンパク質の2D-PAGE上のクマジーポジティブスポットの中、約300個を固定した。グルコース添加条件下で消失した約40個のスポットのアミノ酸配列を決定した。これらの多くはカタボライト応答シス配列を有し、グルコースによるカタボライトレプレッション(CR)を受けるタンパク質である可能性が示唆された。既知遺伝子のほかにSucC,SucDやArginine utilizationに関与するRocA,RocD,RocFなどもグルコースによるCRを受けることが初めて明らかに出来た。2)枯草菌スポアの熱抵抗性などはスポア形成後期に合成される約20種のコートタンパク質がスポアコートを形成することで獲得される。yabG遺伝子は母細胞のSigK依存プロモーターを持ち、T_4から発現する。yabG遺伝子の機能をその欠失変異株を作成して解析した。この変異株は野生株とほぼ同様の熱、クロロホルム、リゾチーム抵抗性を示すスポアを形成した。yabG破壊株と野生株のスポアからSDSと2-ME存在下で蛋白質を可溶化しSDS-PAGEで分析した。可溶化された蛋白質にかなりの違いが認められた。yabG破壊株から特異的に得られたバンドのアミノ酸配列を決定した結果、野生株スポアからは可溶化されないSpoIVA,YrbA,YxeE,YeeK,CotTなどが含まれていた。野生株のSpoIVA,YrbA,CotTの各蛋白質はスポア成熟に伴って、SDS/2-MEに対して難溶性になるが、yabG破壊株スポアでは可溶性のまま存在することが確認され、yabG蛋白質は様々なスポア蛋白質を架橋することによって、難溶化に関与していることを示唆している。

1）在生长阶段固定了枯草芽孢杆菌蛋白2d页上约300个coomazzy阳性斑点。确定了大约40个斑点的氨基酸序列在葡萄糖添加条件下消失。其中许多具有分解代谢产物反应性的顺式序列，表明它们可能是通过葡萄糖进行分解代谢物抑制（CR）的蛋白质。除了已知的基因外，很明显，参与精氨酸利用的ROCA，ROCD和ROCF也能够使用葡萄糖进行CR。 2）枯草芽孢杆菌孢子的热耐药性是当在孢子形成的后期合成的大约20种涂层蛋白形成孢子涂层时获得的。 YABG基因具有母细胞SIGK依赖性启动子，并用T_4表示。通过创建缺失突变体来分析YABG基因的功能。该突变体形成了一种孢子，表现出热，氯仿和溶菌酶耐药性，几乎与野生应变相同。在SDS和2-ME存在下，将蛋白质与YABG破坏和野生菌株溶解，并通过SDS-PAGE分析。在溶解蛋白中观察到显着差异。确定了特异性从YABG破坏应变获得的条带的氨基酸序列，野生应变孢子包含Spoiva，Yrba，Yxee，Yeek，Yeek，Cott等。野生菌株Spoiva，Yrba和Cott的蛋白质在SDS/2-ME中的溶解度较低，但它们在孢子的成熟过程中仍然可溶于YABG破坏应变孢子，这表明YABG蛋白通过交联的各种孢子蛋白通过交联的各种孢子蛋白而与溶解度差。