2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子産物のマッピングと構造決定

使用二维电泳对特定基因缺失突变体的基因产物进行定位和结构测定

基本信息

批准号：
09272220
负责人：
中山建男
金额：
$ 2.43万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)2次元電気泳動の1次元目の等電点電気泳動は、Immobilineゲル(pH4-7L,18cm)、2次元目のSDS-PAGEはExcelGel XL SDSゲル(pH12-14)で行ない、PVDFメンブレンフィルターにエレクトロブロットし、クマジ-ブルー染色し、約400個のポジティブスポットが確認された。アミノ酸配列決定は気相シーケンサ(Procise492,Applied Biosystems Division,Perkin Elmer)で、等電点の低いほうから順次、系統的な解析を行なっている。現在、約100個の分析を終了している。2)胞子形成期のステージT_2の全蛋白質を2D-PAGE後、メンブレンにエレクトロブロットし、約500個のスポットが検出された。この中で、かなりのスポットは、T_2特異的な蛋白質と思われる。3)グルコース添加の条件下で大量の蛋白質を調製し、2D-PAGE後、エレクトロブロットし、染色した。コントロールと比較して、新たに出現した18個のスポットのアミノ酸配列を解析した結果、グルコースによるカタボライト・レプレッションを受ける既知遺伝子の確認が出来ると共に、異なる代謝経路に関与する幾つかの新たな遺伝子(群)がグルコースでのカタボライト・レプレッションを受けることが明らかになった。4)2成分制御の1つのレギュレーター蛋白質の過剰生産株、アミノ酸置換株の全蛋白質を野生株のそれと比較し、新たに出現した約30個のスポットのアミノ酸配列決定を行なった。これらのほとんどは、レギュレーター蛋白質で制御されることがわかった。

1）使用Immobiline凝胶（pH 4-7L，18cm）和第二维中的SDS-PAGE在2D电泳的第一维中进行等电聚焦，并使用ExcelGel XL SDS凝胶（pH 12-14）进行了播放，并在pvdf Membrane Filter上进行电脑，并确认了kumaji-y-bimaji-ume norkue nocky，并确认了阳性。使用气相测序仪（Procise 492，Applied Biosystems Dise，Perkin Elmer）进行氨基酸测序，从下层等电点开始进行系统分析。目前，已经完成了大约100个分析。 2）2天后，将孢子型阶段期间T_2的所有蛋白质电脑电脑电视到膜上，并检测到大约500个斑点。其中，一个相当大的位置似乎是T_2特异性蛋白。 3）在添加葡萄糖的条件下制备了大量蛋白质，然后是2d页，电印迹和染色。与对照组相比，分析了18个新出现的斑点的氨基酸序列，并发现证实了通过葡萄糖分解代谢产物抑制的已知基因，并且参与不同代谢途径的几个新基因（组）涉及与葡萄糖的分解代谢物抑制作用。 4）将一种调节蛋白的过量产生菌株与两个分量对照，即氨基酸取代菌株的整个蛋白质，与野生菌株的蛋白质进行了比较，并进行了大约30个新出现的斑点进行氨基酸测序。发现其中大多数是由调节蛋白调节的。