マイクロ遺伝子重合法を用いた人工バイオシグナル分子創出系の確立

利用微基因聚合方法建立人工生物信号分子产生系统

基本信息

批准号：
10878115
负责人：
芝清隆
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

既存の遺伝子に依存しないで、自由に機能性タンパク質を試験管の中で人工創出する実験系を開発している。2年間の本研究では特に、「新しいバイオシグナル分子としての人工タンパク質を自由に創り出す系を確立する」ことを目標として、11年度の研究では、(1)人工タンパク質を固定したニトロセルロース膜を用いた細胞接着スクリーニング系の確立、(2)ニトロセルロース膜を利用しない人工タンパク質の細胞接着活性測定系の構築、の2つを目標とした。(1)では、精製した人工タンパク質をニトロセルロース膜にスポット固定し、培養細胞(Sf-9)と、室温で2時間インキュベート後、洗浄し、細胞をアミドブラック染色することにより、細胞接着活性を示す人工タンパク質を選択することが可能となった。この手法を用いることにより、20種の人工タンパク質の中で、1種(#331)が細胞接着活性を持つことが明らかとなった。この#331人工タンパク質を用いることにより、アガロースビーズを利用した、細胞接着活性測定系をさらに構築した。これは、#331人工タンパク質のN末に存在するポリヒスチジントラクトを特異的に結合する、NTAアガロースビーズを利用することにより、アガロースビーズの表面に#331人工タンパク質をコートし、これを培養細胞(Sf-9)とインキュベートすることから、細胞をアガロースビーズの表面に吸着させる方法である。磁気金属の封入されたNTAアガローズビーズを利用することにより、迅速に非特異的結合細胞を洗浄できる系も構築することに成功した。これらの2つの技術を利用することから、今後、大規模な細胞接着活性を持つ新しいバイオシグナル分子としての人工タンパク質をスクリーニングすることが可能となった。

我们正在开发一个实验系统，该系统在不依赖现有基因的情况下人为地在试管中创建功能蛋白。在这两年的研究中，尤其是在2011年的研究中“建立一个自由创建人造蛋白作为新的生物元素分子的系统”，（1）一种固定人工蛋白的硝基纤维素膜。细胞粘合剂筛选系统，（2）建立不使用硝酸纤维素膜的人造蛋白质细胞粘附活性测量系统。在（1）中，精制的人造蛋白固定在硝化膜，培养基细胞（SF-9）上，在室温下孵育，洗涤细胞，细胞为Amydo Black以染色可以选择人造蛋白。通过使用这种方法，很明显，一种（＃331）具有20种人造蛋白质之间的细胞粘附活性。通过使用这种＃331人造蛋白，进一步构建了使用琼脂糖珠的细胞粘附活性测量系统。这是NTA Agalose珠的特定结合，它特异性结合了＃331人造蛋白结束时存在的多进instidrint Lact，因此琼脂糖表面涂有＃331的人造蛋白质，并且是培养的细胞（这是培养的细胞）一种吸附细胞在Agalose珠的表面上的方法，因为它与SF-9一起孵育。 NTA Agalose珠与磁性金属的使用成功地构建了一个可以快速清洁非特异性键合细胞的系统。通过使用这两种技术，可以将人造蛋白筛选为具有较大细胞粘合剂活性的新生物信号分子。