野生型p53、p21遺伝子導入による口腔癌細胞株へのアポトーシス誘導

通过引入野生型 p53 和 p21 基因诱导口腔癌细胞系凋亡

• 批准号: 10877327
• 负责人: 小浜 源郁
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877327/
• 关键词: p53; p53関連遺伝子; E1A; p21; 細胞周期停止; E4orf6; 7; アポトーシス; 転写活性化; 組み換えアデノウイルス; 癌細胞株; 増殖抑制; Rax

1.細胞癌化と細胞死の両方に関係すると考えられているアデノウイルスの初期遺伝子E1AとE4orf6/7の機能解析を行い、以下の点を明らかにした。(1)アデノウイルスE1Aは、野生型p53の存在下で強力なアポトーシス誘導能を示すが、E1Aによって不死化した初代ラット細胞株におけるp53は野生型であった。(2)アデノウイルス初期遺伝子E4orf6/7は、ラット培養細胞をトランスフォームし、p53依存性アポトーシス誘導能を示した。2.癌抑制遺伝子であるp53の機能解析を行い、以下の点を明らかにした。(1)p53変異体(Arg→Leu)は、p21,Bax遺伝子の転写を活性化せずにHSC3細胞にアポトーシスを誘導することを見い出した。(2)p53の導入発現によりアポトーシスを起こす細胞株において、p53によってp21^<waf1/cip1が>誘導されていること、またp21を導入発現させてもBax遺伝子が発現している細胞株ではアポトーシスが誘導されることを示した。3.p53ファミリー遺伝子p73,p51とp53の転写活性化能、細胞増殖抑制能、アポトーシス誘導能について比較し、以下の点を明らかにした。(1)p53に比べると弱いが、p73βおよびp51Aは内在性p21蛋白誘導能を示した。この結果は、p53応答性配列を介した転写活性化能の結果と一致した。(2)p73,p51を発現する組み換えアデノウイルスを作製した。DNA断片化を指標にアポトーシス誘導能を検討した結果、複数のヒト癌細胞株において、p73βおよびp51A発現アデノウイルスはp53発現アデノウイルスに比べて強いアポトーシス誘導能を示した。(3)細胞増殖抑制能とp21発現誘導能の結果から、細胞死を誘導するためのp73およびp51の標的遺伝子はp53標的遺伝子とは異なる可能性が示唆された。

1。E1A和E4ORF6/7，对腺病毒的功能分析，被认为与细胞癌和细胞死亡有关，并揭示了以下几点。 （1）腺病毒E1a在野生型p53的存在中显示出强大的凋亡引导，但是第一个大鼠细胞中E1a不朽的p53是野生的。 （2）腺病毒初始基因E4ORF6/7转化了大鼠培养细胞，并指示p53依赖性凋亡。 2. p53的功能分析是一种癌症抑制基因。 （1）p53变体（ARG→LEU）发现，凋亡被诱导至HSC3细胞，而无需激活p21，Bax基因的转录。 （2）在引入p53引起凋亡的细胞库存中，p53诱导了p21^<waf1/cip1，即使引入了p21，p21也表达了p21他被指导了。 3.P53家族基因p73，p51和p53的转移活化能力，细胞生长抑制能力和凋亡诱导能力，并显示了以下几点。 （1）它比p53弱，但p73β和p51a表示内部p21蛋白诱导。该结果与通过p53响应序列的转录激活能力的结果一致。 （2）已经创建了一种表达p73和p51的重组腺病毒。作为DNA片段化的指标，考虑了凋亡诱导能力，在多个人类癌细胞中，p73β和p51a表达腺病毒表现出与p53表达腺病毒相比的凋亡诱导较强。 （3）细胞增殖抑制和p21表达诱导的结果表明，用于诱导细胞死亡的p73和p51的靶基因可能与p53靶基因不同。

项目成果

Nakaya, U. et al.: "Wild-Type p53 overcomes p21-mediated G1 arrest and induces apoptosis in cancer cells expressing Bax."Tumor Res.. 34(1). 69-81 (1999)

Nakaya, U. 等人：“野生型 p53 克服了 p21 介导的 G1 停滞并诱导表达 Bax 的癌细胞凋亡。”Tumor Res.. 34(1)。