糖タンパク質のミクロ不均一性と糖鎖プロセシングの調節
糖蛋白微观异质性和聚糖加工的调控
基本信息
- 批准号:60214032
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Special Project Research
- 财政年份:1985
- 资助国家:日本
- 起止时间:1985 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
糖タンパク質のミクロ不均一性を定量的に扱う試みを行った。研究の第一段階として各個体よりオブアルブミン(OVA)、オボトランスフェリン(OTF)を分離精製、続いて精製糖タンパク質をコンカナバリンAセファロースカラムにより分画した。OVAからはOA-ODの4画分がOTFからは【CA_(2-4)】の3画分が得られ、いずれの個体もこれら以外の成分を含むことはなかった。各成分比の個体間での変動幅も小さく、こういったミクロ不均一性も一定のコントロールの下に生じると考えられた。一方、分画パターン及び成分比の比較より、同一細胞で合成される両糖タンパク質間には全く相関が認められず両者の糖鎖が独立に形成されることを示している。次段階として、2つの糖タンパク質をプロナーゼ分解し、糖ペプチドを調製、ダンシル化後HPLCでマッピングを行った。OVAからは12個のピーク(1-12)が、OTFからは2個のピークが分離され、OVAピークのうち10と12がOTFのものと一致、両糖タンパク質でその不均一性の程度が全く異なることが判明した。HPLCより得られる各成分とこれまで報告されている糖鎖構造との対応付けを行った結果、クロマト上での各ピークの分離に関し、高マンノース型糖鎖は混合型糖鎖に比しより速く溶出されること、マンノース、N-アセチルグルコサミンが一残基異なる成分は相互に良く分離され、ガラクトース一残基異なるものは隣接するピークを形成する等、その特徴が明らかとなった。ピークの定量的分析の結果、ガラクトース一残基異なる成分の組み合わせ、6と7、8と9、11と12の比の間に個体間で一定の関係が認められた。この結果より、invivoでのこれら成分(6,8,11)の生合成に同一のガラクトース転移酵素が関与していることが推定され、ミクロ不均一性がこのような広い特異性を有する転移酵素により生じる可能性が示された。
我们尝试定量处理糖蛋白的微观异质性。作为研究的第一步,从每个个体中分离和纯化卵清蛋白 (OVA) 和卵转铁蛋白 (OTF),然后使用刀豆球蛋白 A 琼脂糖柱分离纯化的糖蛋白。从OVA获得OA-OD的4个级分,从OTF获得[CA_(2-4)]的3个级分,没有一个个体含有这些以外的成分。各成分的比例在个体之间的变异幅度也很小,并且认为这种微观异质性是在恒定控制下发生的。另一方面,分级分离模式和成分比例的比较表明,同一细胞中合成的两种糖蛋白之间不存在相关性,表明两条糖链是独立形成的。下一步,用链霉蛋白酶消化这两种糖蛋白以制备糖肽,将其进行丹磺酰化并通过 HPLC 进行图谱分析。从OVA中分离出12个峰,从OTF中分离出2个峰,并且OVA峰中的10和12与OTF的峰一致,并且发现两种糖蛋白的异质性程度完全不同。将通过 HPLC 获得的各成分与迄今为止报道的糖链结构相关联,结果发现,在色谱法上各峰的分离方面,高甘露糖型糖链比混合型糖链更快。甘露糖和N-乙酰氨基葡萄糖彼此分离良好,半乳糖中只有一个残基不同的成分形成相邻的峰,使它们的特征清晰。对峰进行定量分析的结果,在6和7、8和9、11和12的比率之间观察到个体之间的某种关系,这些比率是相差一个半乳糖残基的组分的组合。这些结果表明,相同的半乳糖基转移酶参与了这些成分(6、8、11)在体内的生物合成,并且微异质性导致了具有如此广泛特异性的转移酶发生这种情况的可能性。
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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