脳ホスホリパーゼDのクローニングと機能解析

脑磷脂酶D的克隆及功能分析

基本信息

批准号：
10155204
负责人：
山下哲
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1. オレイン酸活性化型ホスホリパーゼD(PLD)精製の過程で酵素を強く阻害する脂質性阻害因子がブタ大腸粘膜に存在することを見出したのでそれらの精製,同定を行った.内在性PLD阻害因子はリゾホスファチジルセリン,ホスファチジルイノシトール,リゾホスファチジルイノシトールと同定された.またこれらのリン脂質をPLD1,PLD2,および脂肪酸依存性PLDに添加するといずれのPLDアイソホームも低濃度(10μMオーダー)で阻害した.2. 神経発生におけるPLDの役割を明らかにするためショウジョウバエのホスホリパーゼD遺伝子とcDNAをクローニングした.ショウジョウバエPLDは1278アミノ酸残基から成り,分子量は145Kであった.動植物,酵母のPLDで共通してみられる5個所のコンセンサスはすべて含まれており,PXドメイン,PHドメイン,および活性部位と考えられる2つのHKDモチーフは完全に保存されていた. dPLDとPLD1, PLD2との相同性はそれぞれ37,36%でそれらと等距離にあると考えられた.遺伝子は第2染色体(2R42A16-18)にマップされた. RNAプローブを作成し,in situ hybridizationによってPLDが発生のどの時期に発現するのか調べたところ,発生過程の中で卵,およびblastoderm初期にのみ発現しておりdPLDが発生初期に機能する酵素であることが示唆された.3. アナンダミドは1-アラキドノイルPCから合成されるが,この脂質がどのようにして生ずるのかわかっていなかった.最近我々が精製,クローニングした60Kリゾホスホリパーゼのトランスアシラーゼ活性を詳細に調べたところ,酵素は2-アラキドノイルリゾPCからアラキドン酸を別の分子の2-アラキドノイルリゾPCの1位に転移させる機能を有することが判明し,この酵素がアナンダミド合成の前駆体生成に関与していることが示唆された.

1。在油酸激活的磷脂酶D（PLD）的纯化过程中，发现在猪结肠的粘膜中存在强烈抑制酶的脂质抑制剂，并进行了这些因素的纯化和鉴定。内源性PLD抑制剂被鉴定为溶物磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇和溶物磷脂酰肌醇。当将这些磷脂添加到PLD1，PLD2和脂肪酸依赖性PLD中时，在低浓度（10μM阶）中抑制两个PLD同工型。2。为了阐明PLD在神经发生中的作用，克隆了果蝇磷脂酶D基因和cDNA。果蝇PLD由1278个氨基酸残基组成，分子量为145K。包括植物和植物和酵母中PLD共有的所有五个共识，并且两个HKD图案被认为是PX域，pH结构域，pH结构域和活性位点。 DPLD和PLD1和PLD2之间的同源性分别与它们等距为37,36％。将基因映射到2染色体（2R42A16-18）。创建了RNA探针并原位。我们研究了在杂交开发过程中PLD开发的何时开发的时间，建议DPLD是一种仅在发育过程中卵中和胚泡早期表达的酶，而DPLD是一种功能性的酶，在早期发育的早期起作用。3。 anandamide是从1-芳基多烯酰基PC合成的，但尚不清楚这种脂质是如何发生的。最近，我们详细研究了纯化和克隆的60K溶血磷脂酶的跨离体酶活性，发现该酶的功能是将花生四烯酸从2-芳基二烯酰基lysopc转移到另一个分子1的位置，即2-芳族烯酰基lysopc的位置1，这表明该enzyme参与了enzyme的生产。