Growth suppression of renal cell carcinoma cell lines by a dominant negative H-ras mutant

显性失活 H-ras 突变体对肾细胞癌细胞系生长的抑制作用

基本信息

批准号：
08671786
负责人：
SHINOHARA Nobuo
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671786/
关键词：
renal cell carcinoma cell line Activation of Ras protein Gene Transfer Growth suppression Son of Sevenless (Sos) protein 腎癌 ras癌遺伝子遺伝子治療 GDP GTP交換因子

项目摘要

We examined whether N116Y,which derived from the v-H-ras oncogene by substituting the asparagine-116 with tyrosine, can inhibit the growth of renal cell carcinoma (RCC) cell lines.In order to examine whether high expression of a dominant negative H-ras mutant, N116Y,affects tumor cell proliferation, we constructed an efficient N116Y expression vector, _pZIP-N116Y,and transfected three RCC cell lines (ACHN,NT-2, SMKT-R3) by the lipofection procedure. Transfection of _pZIP-N116Y completely inhibited the colony formation of ACHN,NT-2, SMKT-R3 and no cell survived after G418 selection. Although _pZIP-N116Y may be a potent suppressor of RCC cells, it is possible that the suppressor activity of _pZIP-N116Y depends on neo gene inactivation. To exclude this possibility, we examined the colony forming ability of 6 RCC cell lines (ACHN,NT-2, OSRC2, SMKTR-2, SMKTR-3, SMKTR-4) containing both _pZIP-N116Y and _pSV2_<neo> by cotransfection of these plasmids at the rates of 10 : 1 and 0 : 1. The numbers of G418-resistant colonies were 4% (ACHN), 6% (NT-2) , 10% (OSRC2) , 13%(SMKTR-2) , 20% (SMKTR-3) , and 9% (SMKTR-4) in comparison with the control transfection (0 : 1).To clarify the mechanism of growth suppression in RCC cell lines by N116Y,we analyzed the expression of son of sevenless (Sos) protein which mediates the the activation of Ras protein . AII5 RCC cell lines (ACHN,NT-2, SMKT-R-3, SMKT-R-4, OS-RC-2) expressed compartively high levels of Sos protein, while the amount of Sos protein was very small in normal kidney tissues.These results suggest that a dominant negative H-ras mutant, N116Y,can suppress the proliferation of RCC cell lines.

我们检查了N116Y是否通过将天冬酰胺-116用酪氨酸取代而源自V-H-RAS癌基因，它是否可以抑制肾细胞癌（RCC）细胞系的生长。通过LiPofection程序转染了三个RCC细胞系（ACHN，NT-2，SMKT-R3）。 _pzip-N116Y的转染完全抑制了ACHN，NT-2，SMKT-R3的落形成，并且在选择G418后，无细胞存活。尽管_pzip-N116Y可能是RCC细胞的有效抑制剂，但_pzip-N116y的抑制作用活性可能取决于NEO基因失活。为了排除这种可能性，我们检查了6个RCC细胞系（ACHN，NT-2，OSRC2，SMKTR-2，SMKTR-3，SMKTR-3，SMKTR-4）的菌落形成能力，同时通过这些质粒以10：1和0：1和0：1：1和0：1的速率为4：1。（ACHN），6％（NT-2），10％（OSRC2），13％（SMKTR-2），20％（SMKTR-3）和9％（SMKTR-3）和9％（SMKTR-4）与对照转染相比（0：1）。阐明N116y的RCC细胞中的RCC细胞抑制机制，我们分析了Son of Son of Son的表达（SOS）的表达（SOS）的表达（SOS）的表达（SOS）的表达（SOS）的表现为SOS的表现（SOS）的表现为SOS的表现。 AII5 RCC细胞系（ACHN，NT-2，SMKT-R-3，SMKT-R-4，OS-RC-2）表达了恒定水平的SOS蛋白，而SOS蛋白的量在正常肾脏组织中非常小。这些结果表明，这些主导的H-RAS突变体，N116Y，N116Y，可以抑制RCC细胞的繁殖。